关于溶酶体酶活性的测定方法介绍

　　溶酶体贮积症的诊断是通过酶活性测定或测代谢产物进行的。过去测酶活性的方法与步骤比较复杂，底物用量较大。1980年后荷兰 Erasmus大学遗传代谢病试验室应用微量酶活性测定法获得成功。它使用了新的人工合成底物，提高了实验的灵敏度及准确性, 简化了实验步骤。1990年中国医学科学院基础医学研究所医学遗传研究室引进了该试验室的微量酶活性测定法, 先后建立了10种酶的测定方法。该室在进行以上10种酶活性测定时，将原来在试管中进行的实验，改在Eppendroff管中进行，并将各种酶活性测定方法规范化。其结果是简化了实验步骤、提高了准确性，能准确计算出加入的底物与酶源的量。如黑?性痴呆病是由于氨基已糖苷酶A(Hex A)缺乏所致,过去使用荧光底物4-甲基-β-D-N-乙酰葡胺（4MUG）先测出Hex 总活性后再测出Hex B活性, 并据此计算出Hex A活性。使用4-甲基-β-D-N-乙酰葡胺-6-硫酸（4MUGS）作底物, 可直接测出Hex A活性。又如MPS Ⅳ A是由于半乳糖-6-硫酸脂酶缺陷所致，过去使用同位素标记底物，现用新荧光底物，省略了同位素标记步骤。 除芳基硫酸酯酶A及B两种酶用成色底物外，其他均用荧光底物。每种酶活性测定方法用统一的步骤,即20 μl细胞匀浆加入40 μl底物, 充分混匀, 置37℃水浴温浴1小时后,加入400 μl 0.5 mol/L 碳酸钠与碳酸氢钠缓冲液（pH 10.7）终止反应, 用荧光分光光度计测定酶活性, 激发波长为365 μm,发射波长为445 μm。以上方法的改进，都为在孕早期取绒毛做产前诊断打下基础。