操作方法是病人弯曲侧卧床上，双手抱膝，使腰椎后凸、椎间隙增宽。局部常规消毒，浸润麻醉后，穿刺。一般刺入4～5cm即有阻力，感觉阻力突然降低，以后拔出针芯，转动针尾即可见脑脊液滴出。按着不同目的与具体情况放取脑脊液。然后插上针芯，拔出穿刺针，用消毒纱布块固定，去枕平卧4～6小时。
腰椎穿刺前应注意如局部皮肤、软组织、骨有炎症时不可穿刺；颅内明显压力增高有脑疝迹象者不能穿刺；病情危重处于休克或濒于休克者不能穿刺；有脊髓压迫症状病、脊髓功能已处于完全消失的临界状态不可穿刺。穿刺术后预防头痛、脑疝形成和感染的发生。
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