照高效液相色谱法（2010年版药典二部附录Ⅴ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（5～10μm）；以0.2mol/L硫酸盐缓冲液（取无水硫酸钠28.4g，加水溶解后，加磷酸2.7ml，乙醇胺调节pH值至2.3，加水至1000ml）－乙腈（74：26）为流动相；柱温为40℃；检测波长为214nm。取系统适用性试验溶液20μl（取胰岛索对照品，用0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml中约含40单位的溶液，室温放置至少24小时），注入液相色谱仪，记录色谱图，胰岛素峰和A21脱氨胰岛素峰（与胰岛素峰的相对保留时间约为1.2）之间的分离度应不小于1.8，拖尾因子应不大于1.8。
测定法
取本品适量，精密称定，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并定量稀释制成每1ml中约含40单位的溶液（临用新制，2～4℃保存，48小时内使用）。精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取胰岛素对照品适量，同法测定。按外标法以胰岛素峰面积与A21脱氨胰岛素峰面积之和计算，即得 。
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