用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.27%磷酸二氢钾溶液（用2.2%的氢氧化钾溶液调节pH值至6.5）－甲醇（30：70）为流动相；检测波长为340nm。取阿米卡星对照品和杂质A对照品各适量，加水溶解并稀释制成每1mL中各含100μg的混合溶液，精密量取0.2mL至10mL量瓶中，加1.0%的2,4,6-三硝基苯磺酸溶液2.0mL、吡啶3.0mL，密塞，强力振摇30秒，置75℃水浴保温45分钟，在冷水中冷却2分钟，加冰醋酸2.0mL，密塞，强力振摇30秒，作为系统适用性试验溶液。取20μL注入液相色谱仪，阿米卡星峰与杂质A峰的分离度应不小于3.5；理论板数按阿米卡星峰计算不低于3500。
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