叶酸为黄色或橙色薄片状或针状结晶，微溶于水，但其钠盐溶解度较大，不溶于有机溶剂，无臭，无味。
叶酸在维生素中是较不稳定的一种，在水溶液中易被光解破坏，在酸性溶液中对热不稳定，超过100℃即被破坏，但在中性和碱性溶液中即使加热到100℃维持1h也不被破坏。各种叶酸的衍生物以蝶酰谷氨酸最稳定，四氢叶酸最不稳定，易遭受氧化降解而失去活性。
硫醇、维生素C等还原剂能清除氧自由基，防止四氢叶酸的氧化作用，可以从多方面保护叶酸。环境中的亚硫酸盐与叶酸作用，导致叶酸侧链解离，生成还原型蝶啶-6-羧醛和氨基苯甲酰谷氮酸。
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