维生素B5的分析方法包括微生物法、实验动物法、放射免疫法以及化学法。分析材料的复杂性、多样性阻碍了化学法的发展。雏鸡生长法被广泛用于测定结合形式和游离形式的维生素B5。放免法以及白动荧光分析技术已成功地用于维生素B5测定。
维生素B5的微生物法测定法使用较广泛，但测定前必须使维生素B5从辅酶形式中游离出来。由于方法不得当，过去用徽生物法测定的饲料中维生素B5含量的数值普遍偏低。使维生素B5从结合形式中游离出来的方法包括：
（1）用肠磷酸酶裂解磷酸键
（2）用鸽子或鸡肝脏中的酶裂解琉基乙胺和泛酸之间的化学键。
不能用水解法释放游离维生素B5，这将导致维生素的破坏。许多微生物可以用来测定维生素B5，其中胚芽乳杆菌（阿拉伯糖乳酸杆菌）应用最广泛。
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