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关于慢病毒的相关实验介绍

2023.3.21
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coco5517

认真做好每一件喜欢的事,把每一件要做的事都变成喜欢并认真去做的事

  一、实验目的

  对于一些按常规方法难以转染甚至无法转染的细胞,通过病毒介导的实验能够大大提高基因的转导效率,以达到目的基因的高效瞬时表达。

  二、实验流程

  1. 根据目的基因相关信息(序列,序列号等),构建含有外源基因或siRNA的重组载体;

  2. 对于测序正确的重组质粒,提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒;

  3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞,进行病毒包装和生产,收集病毒液;

  4. 浓缩、纯化病毒液;

  5. 用高质量的病毒液感染细胞;

  6. 通过定量PCR精确测定病毒滴度(高精确滴定方法)和Western 分析实验结果;

  7. 用高质量的病毒液感染宿主细胞;检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进行稳定转染细胞株的筛选,通常状况下,筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。

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