1. 麻醉药剂量应梢大于普通用量。
2. 一定要仔细剔除干净脑膜组织,否则会极大地影响培养细胞的纯度。
3. 细胞培养技术不同于分子生物学,由于离心速度较慢,离心组织和细胞贴壁不如核酸紧密,取出离心后的上清液时一定要用吸管吸取,禁止用倾倒的方法。
4. 为保护胚胎,胚胎操作应在放置冰块的托盘中进行,保持低温。
5. 取中脑组织时应先用两把镊子夹住所取区域,然后用刀片切开。
6. 胰酶在细胞离心时会对细胞产生毒性,所以胰酶离心前可加入一定的解剖液稀释。
7. 细胞离心时最好在冰冻离心机内进行,以保持细胞活力。
8. 吹打细胞前用火烧吸管头,发红时逐渐后退,使吸管尖变钝,减少吹打过程中对细胞的损害,实验中也发现吹打时有一定的阻力。
9. 鼠胚胎较多时可分批消化,否则体外时间较长,细胞存活率低。
10. 用Neurobasal medium + B27。
11. 胰酶消化时加入EDTA可增强消化效果。
12. 关键在于取材的准确和原代细胞的状态。 展开 |