L-蛋氨酸砜亚胺作为谷氨酰胺合成酶活性的有效抑制剂,已广泛应用于仓鼠卵巢(CHO)等哺乳动物细胞系质粒整合的筛选。
细胞生长在缺乏谷氨酰胺的培养基中,谷氨酰胺合成酶的内源性活性受到抑制,会引起未过表达细胞的死亡。另外,MSX-谷氨酰胺合成酶筛选机制比甲氨蝶呤-DHFR系统更有优势,能够显著缩短产生高稳定性和高扩增性克隆的时间。所以,L-蛋氨酸砜亚胺(MSX)筛选谷氨酰胺合成酶过表达细胞应用的更加广泛。
在筛选谷氨酰胺合成酶过表达细胞的发酵过程中对L-蛋氨酸砜亚胺含量进行分析,有助于生产工艺的优化;另外,其对人体具有一定的危害,需要控制在成品的含量。
色谱分析作为最稳定的技术手段,广泛应用于制药行业的研发与质控。由分子结构可知,L-蛋氨酸砜亚胺是一个极性分子,考虑采用亲水分离模式进行分析;因良好的兼容性和高灵敏度,选择质谱作为检测器。
作为最早商业化的“熔融核”(“核-壳”叫法居多)颗粒色谱柱产品之一,Ascentis® Express系列采用先进的硅胶键合技术,柱流失超低,分离性能优异;键合相种类丰富,独特的五羟基键合相Ascentis® Express OH5是其中的佼佼者。在亲水分离模式中,其硅胶表面存在较厚的富水层,可提供优异的选择性能。
分 析 条 件
液相色谱柱
Ascentis® Express OH5, 2.7 µm, 10 cm x 3.0 mm
柱温
25℃
流动相
A-乙腈/B-0.1%甲酸水(pH=3.5, 甲酸铵调节)=75/25
流速
0.4mL/min
进样量
5μL
检测器
100 g
以上实例表明,在亲水分离模式下,Ascentis® Express OH5液相色谱柱能够有效地监控L-蛋氨酸砜亚胺及其代谢物的含量。
附 录
名称尺寸货号
Ascentis® Express OH5 2.7μm
2.1mm*50mm
53749-U
2.1mm*75mm
53755-U
2.1mm*100mm
53757-U
2.1mm*150mm
53764-U
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