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案例分析|培养基添加物-L蛋氨酸砜亚胺含量分析

默克分析化学
2019.4.04

L-蛋氨酸砜亚胺作为谷氨酰胺合成酶活性的有效抑制剂,已广泛应用于仓鼠卵巢(CHO)等哺乳动物细胞系质粒整合的筛选。

细胞生长在缺乏谷氨酰胺的培养基中,谷氨酰胺合成酶的内源性活性受到抑制,会引起未过表达细胞的死亡。另外,MSX-谷氨酰胺合成酶筛选机制比甲氨蝶呤-DHFR系统更有优势,能够显著缩短产生高稳定性和高扩增性克隆的时间。所以,L-蛋氨酸砜亚胺(MSX)筛选谷氨酰胺合成酶过表达细胞应用的更加广泛。

在筛选谷氨酰胺合成酶过表达细胞的发酵过程中对L-蛋氨酸砜亚胺含量进行分析,有助于生产工艺的优化;另外,其对人体具有一定的危害,需要控制在成品的含量。

色谱分析作为最稳定的技术手段,广泛应用于制药行业的研发与质控。由分子结构可知,L-蛋氨酸砜亚胺是一个极性分子,考虑采用亲水分离模式进行分析;因良好的兼容性和高灵敏度,选择质谱作为检测器。

作为最早商业化的“熔融核”(“核-壳”叫法居多)颗粒色谱柱产品之一,Ascentis® Express系列采用先进的硅胶键合技术,柱流失超低,分离性能优异;键合相种类丰富,独特的五羟基键合相Ascentis® Express OH5是其中的佼佼者。在亲水分离模式中,其硅胶表面存在较厚的富水层,可提供优异的选择性能。

分 析 条 件

液相色谱柱

Ascentis® Express OH5, 2.7 µm, 10 cm x 3.0 mm 

柱温

25℃

流动相

A-乙腈/B-0.1%甲酸水(pH=3.5, 甲酸铵调节)=75/25

流速

0.4mL/min

进样量

5μL

检测器

100 g 

以上实例表明,在亲水分离模式下,Ascentis® Express OH5液相色谱柱能够有效地监控L-蛋氨酸砜亚胺及其代谢物的含量。

附     录

名称尺寸货号

Ascentis® Express OH5 2.7μm

2.1mm*50mm

53749-U

2.1mm*75mm

53755-U

2.1mm*100mm

53757-U

2.1mm*150mm

53764-U

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