摘要
本实验重现了BJS201913食品中辛基酚等5种酚类物质的测定方法，使用Cleanert PEP固相萃取柱结合液相色谱串联质谱的检测方法对肉类、婴幼儿米粉、食用油等样品进行了测试。样品经乙腈提取后，Cleanert PEP固相萃取柱净化，乙腈洗脱，Kinetex EVO C18液相色谱柱进行检测，自动进样器前连接Venusil XBP C18色谱柱作为捕集柱，采用内标法定量。结果表明，当添加水平为5 µg/kg和20 µg/kg时，5种酚类物质相对回收率在80% ~ 120%之间，能够满足检测要求。
关键词：辛基酚；壬基酚；正壬基酚；正辛基酚；双酚A；Cleanert PEP；Kinetex EVO C18；Venusil XBP C18；
样品信息
表1待测组分与内标物质信息
实验部分
仪器、试剂与材料
主要仪器设备：
液相色谱串联质谱仪（AB SCIEX API 4000+）
试剂材料：
固相萃取小柱：Cleanert PEP，200 mg/6 mL，使用前用18 mL甲醇活化，6 mL水平衡；
实验用乙腈、水、甲醇均为质谱级试剂；
标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚A标准物质10 mg，用甲醇溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。于-20 ℃冰箱中保存。
混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚A标准储备液1 mL至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，置于4 ℃冰箱中保存。
同位素内标标准储备溶液（100 mg/L）：分别称取壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚A -D4同位素内标10 mg，用甲醇溶解，并转移至100 mL容量瓶中，定容至刻度，标准储备液浓度为100 mg/L。于-20 ℃冰箱中保存。
同位素内标混合标准中间溶液（1 mg/L）：分别准确吸取壬基酚-13C6、正壬基酚-D4、对辛基酚-13C6、正辛基酚-D17、双酚A -D4同位素内标标准储备液各1 mL至100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成1 mg/L的混合标准中间溶液，于4 ℃冰箱中保存。
同位素内标混合标准工作液（100 µg/L）：分别准确吸取同位素内标标准中间溶液1 mL至10 mL容量瓶中， 用甲醇定容至刻度，摇匀，制成100 µg /L的混合标准工作液。临用时配制。
混合标准工作溶液：分别准确吸取混合标准中间液，加入同位素内标混合标准中间溶液，使壬基酚、正壬基酚、辛基酚、正辛基酚和双酚A浓度分别为0.5 µg/L、1 µg/L、2 µg/L 、5 µg/L、10 µg/L、20 µg/L和50 µg/L的混合标准系列工作溶液。临用时配制。
样品基质
实验采用的基质分别为猪后臀肉、冻虾肉、鸡蛋、黄桃水果罐头、米粉、植物油，均质后放冰箱冷冻备用。
样品制备
样品提取
称取1 g已均质好的样品，置于50 mL 离心管中，加入同位素内标混合标准工作溶液0.1 mL和5 mL 乙腈，涡旋混匀1 min，超声提取15 min，8000 r/min离心5 min，取上层清液；残渣再使用5 mL乙腈重复提取一次，合并乙腈相，置冰箱-20℃冷冻2小时，取出于8000 r/min离心5 min，取上清液待净化。
样品净化
将上述待净化液加30 mL水稀释，混匀，全部经过预先活化、平衡的Cleanert PEP柱，控制流速为1 ~ 2 mL/min，弃去滤液，然后使用12 mL的60 %甲醇水溶液（V/V）淋洗，弃去淋洗液，再用6 mL乙腈洗脱，接收洗脱液，于50℃下氮吹，控制氮气流量，缓慢氮吹至近干，残渣用1 mL甲醇复溶，8000 r/min离心5 min，取上层清液待测。
实验条件
色谱条件
色谱柱：Kinetex EVO C18；(2.6 µm，3.0 × 50mm)；
捕集柱：Venusil XBP C18；(5 µm，4.6 × 50 mm)；
流动相A：0.05%氨水溶液；
流动相B：甲醇；
流 速：400 µL/min；
柱 温：30℃；
进样量：10 µL；
梯度程序：
表2.梯度条件
质谱条件
电喷雾电离负离子模式 (ESI-)；采集方式：多反应监测 (MRM)，离子源温度：650℃；雾化气压力：55 psi，辅助气压力：65 psi；气帘气压力：20 psi；电喷雾电压：-4500V。
表3.化合物定性、定量离子和质谱分析参数
注：表3中标“*”为定量离子。
结果与讨论
由表4~5可知，采用Cleanert PEP固相萃取柱结合LC-MS/MS对肉类、婴幼儿米粉、食用油等基质中的5种酚类物质进行测试，加标回收率在80% ~ 120%之间，RSD均小于10%，方法中5种酚类物质的检出限为0.1 µg/kg ~ 1.0 µg/kg（S/N=3），能够满足检测要求。
表4.不同基质加标回收实验结果
(n=6，添加水平5 µg/kg)
表5. 不同基质加标回收实验结果
(n=6，添加水平20 µg/kg)
注：双酚A使用双酚A-D4校正，壬基酚使用壬基酚13C6校正，正壬基酚使用正壬基酚-D4校正，辛基酚使用辛基酚13C6校正，正辛基酚使用正辛基酚-D17校正。
实验谱图
图3. 5 µg/kg猪肉基质加标色谱图
图4. 5 µg/kg虾肉基质加标色谱图
图5. 5 µg/kg植物油基质加标色谱图
图6. 5 µg/kg米粉基质加标色谱图
图7. 5 µg/kg黄桃罐头基质加标色谱图
图8. 5 µg/kg鸡蛋基质加标色谱图
结论
本实验重现了BJS201913食品中辛基酚等5种酚类物质的测定方法，使用Cleanert PEP固相萃取柱结合LC-MS/MS对肉类、婴幼儿米粉、食用油样品进行了检测。实验表明，加标量为5 µg/kg、20 µg/kg时，5种酚类物质的回收率在80% ~ 120%之间，RSD值均小于10%，平行性良好，能够满足实验要求。说明Cleanert PEP固相萃取柱可用于食品中辛基酚等5种酚类物质的检测。
附：相关产品
扫码获取
电子版完整应用报告
首页
