（图片来源：包图网）
01
适用范围
●
适用于鸡肌肉、肝脏、肾脏和脂肪中二硝托胺及其代谢物残留量的检测。（本实验样品采用鸡肌肉）
参考标准：《GB-31613.3-2021食品安全国家标准 鸡可食性组织中二硝托胺残留量的测定 方法二》
02
提取步骤
●
称取试料2g（准确至±0.02g），加磷酸盐缓冲液（pH 6.0）10mL（鸡肝脏、肾脏加磷酸盐缓冲液（pH 4.0），10000r/min均质1min，8000r/min离心5min，收集上清液，残渣加相应磷酸盐缓冲液10mL，重复处理，合并上清液。准确移取上清液8mL，用氢氧化钠溶液调pH至7.0，8000r/min离心5min，取上清液，备用。
03
SPE净化步骤
●
SPE柱：月旭Welchrom® BRP，规格：60mg/3mL。
活化：3mL甲醇、3mL水，弃去；
上样：取备用液过柱，弃去；
淋洗：3mL水，抽干；
洗脱：4mL 0.1%甲酸-乙腈洗脱，压干并收集于离心管中；
复溶：将洗脱液过0.22μm滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。
04
色谱条件
●
UPLC条件
色谱柱：Ultimate® UHPLC XB-C18，1.8μm，2.1×100mm。
流动相：0.1%甲酸溶液：乙腈=10:90；
柱温：30℃；
流速：0.2mL/min；
进样体积：2µL。
质谱条件
离子源：电喷雾离子源（ESI）；
扫描方式：正负离子扫描（二硝托胺为负离子模式、3-ANOT为正离子模式）；
检测方式：多反应监测（MRM）模式；
离子喷雾电压：5500V（-4500 V）；离子源温度：500℃；
气帘气（CUR）10psi；雾化气（GS1）55psi；辅助气（GS2）50psi。
其他质谱参数：见表2
表1 多反应监测模式（MRM）参数
化合物
母离子(m/z)
子离子(m/z)
碰撞能CE/V
二硝托胺
224.1
76.90*
-22
150.87
-16
3-ANOT
196.03
106.93
16
132.91
2005
色谱图或者加标回收率结果
●
图1. 二硝托胺标准品20ng/mL图谱
图2. 3-ANOT标准品20ng/mL图谱
图3. 鸡肉样品空白图谱
图4. 鸡肉样品加标100μg/kg二硝托胺图谱
图5. 鸡肉样品加标100μg/kg 3-ANOT图谱
表2 加标回收率表（内标法）
物质
加标水平
（100μg/kg）
加标水平
（500μg/kg）
加标水平
（1000μg/kg）
二硝托胺
平均回
收率
RSD值
平均回
收率
RSD值
平均回
收率
RSD值
105.26%
2.72%
96.00%
2.06%
92.26%
2.24%
06
相关产品信息
●货号名称规格
00522-20009
SPE小柱
Welchrom® BRP，
60mg/3mL，50pk
00837-05006
50mL螺口
尖底离心管
Welchrom® 一次性离心管，
平盖，锥形底，RCF12000xg，
袋装，未灭菌，50mL，50/包
00837-05002
15mL螺口
尖底离心管
Welchrom® 一次性离心管，
平盖，锥形底，RCF12000xg，
袋装，未灭菌，15mL，50/包
00821-32291
盖子+垫片
Welchrom® 预切口红色特氟龙/
白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹
开口盖 中心孔6mm 100pk
00821-40927
样品瓶
Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口
样品瓶 带书写处 11.6*32mm
一级水解玻璃 100pk
00201-11012
UHPLC
色谱柱
Ultimate®UHPLC
XB-C18，1.8μm，
2.1×100mm
000802-02201
针头式
过滤器
Welchrom® 进口NY，
13mm*0.22μm，100pk
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