前言
随着社会发展和生活质量的提高，食品安全问题受到关注，如何快速、准确的检测食品中维生素ADE，成为热点问题。为解决这一问题，华谱基于二维色谱分离技术开发出《乳制品中的维生素A、维生素D及四种维生素E的分析》，在样品经过前处理后，一次进样即可快速实现样品中维生素A、维生素D及四种维生素E的定量分析，不仅可以提高分析效率，也可提高VD检出灵敏度，得到客户的一致好评。
本次我们对原有方法进行升级优化，将二维液相色谱与在线固相萃取 (Online SPE) 技术进行串联，实现了前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂的前处理过程，极大的提高样品检测效率。整个分析过程只需一次进样，26 min即可完成样品中VA、VD和四种VE的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回收率不稳定现象。下面来跟小编具体了解一下方案吧！
图1. 华谱S6000在线SPE串联二维液相色谱仪
图2. 中心切割法分析维生素A、D、E过程
结果与讨论
① 标准品与实际样品检测
图3. 维生素A、D、E标准品
峰1：VA；峰2：δ-VE；峰3：β-VE；峰4：γ-VE；峰5：α-VE；峰6：VD2；峰7：VD3
图4. 某品牌奶粉中的维生素A、D、E色谱图
峰1：VA；峰2：α-VE；峰3：VD2；峰4：VD3
② 重复性结果
重复6针进样考察体系稳定性，保留时间RSD范围为0.13%-0.32%、峰面积RSD范围为0.42%-1.23%，方法重复性良好。
图5. 维生素A、D、E重复性结果
③ 线性、检测限与定量限
实验针对VA、VD及 VE进行了线性、检测限及定量限的考察。取7种维生素标准溶液配制成不同浓度的混合标准溶液，以待测物峰面积为纵坐标，待测物浓度为横坐标绘制标准曲线，VA在0.02~10 μg/ml内线性相关系数为0.9999，VE在0.2~100 μg/ml内线性相关系数为0.9985，VD在0.0024~1.2 μg/ml内线性相关系数为0.9998。以色谱峰峰高信噪比S/N ≥ 3为方法检测限（LOD），S/N ≥ 10为方法定量限（LOQ），取样量为5 g时，测定7种维生素的检测限和定量限，数据列于下表。
表1. 维生素A、D、E的线性、检测限和定量限
④ 加标回收率
取奶粉样品，添加维生素A、维生素D、维生素E混合标准溶液，按照上述前处理方法进行处理，考察回收率。测定两个不同浓度水平的加标回收率，每个浓度水平平行3份。结果表明各维生素的回收率范围在85.2%~109.2%，RSD 结果符合要求。
图6. 平均回收率结果
结论
本文使用在线SPE串联二维液相色谱，实现维生素ADE的快速检测。当前国标法前处理冗长且复杂，不适合批量前处理样品，而且维生素稳定性差不适用过长的前处理方法。本方法利用阀切换的方式，皂化液可直接进样净化，能够实现快速同时检测维生素ADE。该方法不仅节省前处理时间，提高工作效率，避免了大量有毒害试剂的使用，更具有简便、快速，自动化程度高，重现性好等特性，方法回收率高，因此可作为食品中维生素ADE的测定方法推广应用。
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