省时省力！在线SPE串联二维高效液相色谱法检测维生素A、D、E

前言

在食品检测实验室里，最让人头疼的一个实验就是维生素A、D、E的检测。国家现行标准《GB 5009.82-2016》需采用液-质联用（维护成本高）或半制备正相净化（前处理繁琐）对其进行测定，检测相对困难。

本期小编将分享一种在线SPE串联二维高效液相色谱法快速测定维生素A、D、E。该方法是参照华谱现有二维液相色谱并串联在线固相萃取技术，可实现食品中维生素A、两种维生素D及三种维生素E异构体的中心切割快速分析方法。此方法可将前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂前处理过程，大大提高分离效率。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回收率不稳定现象。

图1. 华谱 S6000 在线SPE串联二维液相色谱仪

图2. 仪器连接示意图

中心切割法

分析维生素 A、D、E 

第一阶段：进样在线SPE净化，此时阀1（左阀）的位置为1–2，阀2（右阀）的位置为1–2；

第二阶段：SPE洗脱检测VA，此时阀 1的位置为1–6，阀2的位置为1–2，第一维检测VA；

第三阶段：捕获 VD，第二维检测VD，此时阀1的位置为1–2，阀2的位置为1–6；

第四阶段：第一维液相色谱继续检测VE，第二维液相色谱检测VD，此时阀1的位置为1–2，阀2的位置为1–2。

图3. 中心切割法分析维生素A、D、E分析过程

实验结果

① 样品测定

使用本方案对维生素A、D、E进行在线SPE串联二维检测，首先在线SPE净化皂化液，第一维分析VA、VE，对VD进一步净化，第二维对VD进行分析，结果如下图所示，该方法可实现维生素A、D、E的快速检测。

图4. 维生素A、D、E标准品测定结果色谱图

图5. 婴儿奶粉中的维生素A、D、E色谱图

② 线性、检测限与定量限

实验针对VA、VD及 VE进行了线性、检测限及定量限的考察。取6种维生素标准溶液配制成不同浓度的混合标准溶液，以待测物峰面积为纵坐标，待测物浓度为横坐标绘制标准曲线，维生素A、D、E的线性相关系数R2均大于0.999。以S/N ≥ 3为检测限，S/N ≥ 10为定量限，6种维生素的检测限和定量限均满足国标要求（见表1）。

表1. 维生素A、D、E的线性、检测限与定量限

③ 重复性

以实际样品考察方法重复性，连续进样，各个维生素保留时间的RSD在0.08%~0.64%之间，峰面积的RSD在0.39%~2.18%之间（见图7），结果表明该方法在连续进样时重复性良好。

图6. 维生素A、D、E重复性色谱图

图7. 维生素A、D、E重复性结果

④ 加标回收率

取奶粉样品，添加6种维生素A、维生素D、维生素E混合标准溶液，按照前处理方法进行处理，考察回收率。测定两个不同浓度水平的加标回收率，每个浓度水平平行3份。结果表明各维生素的回收率均在80%~120%，方法的相对标准偏差( RSD) 为2.0%~7.0%（见图8）。

图8. 维生素A、D、E回收率结果

结论

本文在现有二维液相检测方法基础上进行优化，利用阀切换的方式，皂化液可直接进样净化，能够实现快速在线SPE串联二维高效液相色谱维生素A、D、E。

该方法可节省前处理时间，提高工作效率，避免大量有毒害试剂的使用，更具有简便、快速，自动化程度高，重现性好等特性，因此可作为食品中维生素A、D、E的测定方法推广应用。