NTera-2/clone D1 (NT2) 和 SH-SY5Y是神经元分化研究中最常用的两种细胞系。NT2 细胞被用作研究人胚胎干 (hES) 细胞多巴胺能分化的模型系统。SH-SY5Y细胞系广泛用作神经元分化、存活和凋亡的细胞培养模型。
管家蛋白在以这两种细胞系为研究材料的Western实验中是非常用的。但是，越来越多的证据表明，这些管家蛋白本身会受到药物治疗、细胞周期阶段、分化或细胞增殖的影响。神经元分化是一个动态过程，涉及细胞蛋白表达的显着变化。
研究表明（视黄酸，RA）诱导的 NT2 和 SH-SY5Y 细胞分化期间β-actin、β-tubulin的表达具有显著差异（文献1）。如果不加验证，以β-actin、β-tubulin为内参，就有可能会造成误导性的Western定量结果。
未分化和已分化的SH-SY5Y细胞
常用的三种管家蛋白β-tubulin、β-actin及GAPDH在未分化及已分化SH-SY5Y细胞系中的Western条带
未分化
已分化
β-tubulin、β-actin及GAPDH在未分化及已分化SH-SY5Y细胞系中的表达差异
从研究结果来看，actin在未分化及已分化SH-SY5Y细胞系样品中的表达量差异竟有2倍之多；tubulin的表达量差异也在1.5倍左右；GAPDH的表达略为稳定，但也出现了较为明显的差异化。
Stain-Free被证明是一个比常用管家蛋白（actin、tubulin、GAPDH）更为稳定、精准的内参定量参考，并且具有更为理想的线性动态范围，是传统管家蛋白内参的替代（文献2）。
相同实验条件下，Stain-Free总蛋白信号与actin、tubulin、GAPDH的动态范围差异
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参考文献：
1.Housekeeping Proteins: Limitations as References During Neuronal Differentiation. The Open Neuroscience Journal
2.An old method facing a new challenge: re-visiting housekeeping proteins as internal reference control for neuroscience research. Life sciences
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