为什么要检测维生素D2？

为什么要检测维生素D2?这是一个困惑了很多临床及检验工作者的问题，为更好的解答此疑难问题，让我们用“火眼金睛”看VD，从来源、代谢、生理功能、检测、临床价值一一做解答。

维生素D的来源与代谢

维生素D是一组脂溶性类固醇，基本化学结构是胆固醇，主要形式是维生素D2（钙化醇）与维生素D3（胆骨化醇）。维生素D2多含于植物性食物中，由植物的麦角固醇经阳光照射而合成，多来源蘑菇、维生素D2补充剂。维生素D3可由人体皮肤经阳光（紫外照射）照射合成，D3多含于动物性食物中，鱼、蛋黄、肝脏等食物含量丰富。维生素D2和D3经过血液一起运输到肝脏，在微粒体中经单氧酶系统作用，形成25-羟基维生素D［25-(OH)D］，半衰期为T1/2=2~3weeks。25-(OH)D然后进入肾脏，在肾线粒体羟化酶作用下二次羟化形成有活性的1,25-双羟基维生素D［1,25-(OH)2D］，半衰期为T1/2=3~4hr。25-(OH)D是体内循环中主要代谢产物，含量较高，半衰期比较长，较稳定，能够反映食物摄入和日光照射合成的维生素D总量，因此血清中25-(OH)D浓度是评估体内维生素D水平最为有效且合理的指标[1-2]。VD在人体的代谢如下图所示[3]。

图1 维生素Ｄ代谢

维生素D的生理功能

经典作用：维生素Ｄ对肌肉骨骼健康至关重要，因为它促进肠道钙磷吸收，并在肌肉功能中起重要作用[1]，对骨代谢和钙稳态有重要功能（缺乏的典型疾病：骨质疏松、维生素D缺乏性佝偻病）。

非经典作用：包括抑制细胞增生、刺激细胞分化、抑制血管生成、刺激胰岛素合成、抑制肾素合成、刺激巨噬细胞内抑菌肽合成、抑制 PTH 合成和促进骨骼肌细胞、钙离子内流等[2]。补充VD可能获益的疾病如糖尿病、代谢综合征、冠心病、高血压、自身免疫性疾病、多种癌症、多发性硬化、癫痫、抑郁症、多囊卵巢综合征、呼吸道感染和流感、孕妇及其子代先兆子痫、妊娠期糖尿病、细菌性阴道炎、胰岛素抵抗、早产、胎儿骨密度、骨强度、大脑发育、出生体重、病毒感染、哮喘、I型糖尿病等。

血清25-(OH)D的检测

液相色谱与质谱串联分析 ( liquid chromatography-mass spectrometry /mass spec-trometry，LC-MS /MS) 能够区分25-(OH)D3、25-(OH)D2及其他与25-(OH)D分子结构相似的物质，该检测方法的特异性最高，且灵敏度也极高，可以认为是25-(OH)D检测的 “金”标准[2]。其他方法与之的主要对比如下表[4]

因LC-MS/MS检测耗费较大，设备成本较高，目前临床更为常用的血25-(OH)D测定方法为化学发光法，化学发光VS串联质谱的检测研究显示：

1、不同厂家免疫学方法VD检测试剂效能差异较大[5]。主要表现在：各试剂的检测范围、检测限、定量限存在较大差异；各试剂不能以同等摩尔效率对D2及D3进行检测；各试剂精密度有差异。

图2 不同厂家免疫学方法VD检测试剂效能差异较大

2、样本中25-(OH)D2的存在会影响免疫法检测维生素D的准确性[5]：166个只含有25-(OH)D3的样本：各厂家免疫法试剂的检测结果与质谱法的检测结果相关性较高、一致性较好、平均偏差较小；111个同时含有25-(OH)D2和25-(OH)D3的样本：各厂家免疫试剂与质谱法检测结果的相关性及一致性均下降，平均偏差增大。

图3 样本中25-(OH)D2的存在会影响免疫法检测维生素D的准确性

3、样本中25-(OH)D2的存在会影响临床对维生素D水平判读的有效性[6]：在所有的245份样本中各免疫法试剂检测的结果与质谱法的符合率均较低，在不含有25-(OH)D2的154份样本中，各免疫法试剂检测的结果与质谱法的符合率均有一定提高。

图4 样本中25-(OH)D2的存在会影响临床对维生素D水平判读的有效性

4、我国有近16%的人群体内含有25-(OH)D2，一项基于23695人群研究显示[7]：我国有13.9%的男性样本、17.5%的女性样本可检测到25-(OH)D2，且25-(OH)D2的水平与25-(OH)D3的水平呈显著负相关，与25-(OH)D的水平呈显著正相关，说明我国有相当一部分人群体内是存在25-(OH)D2的。考虑到25-(OH)D2的存在会影响免疫法检测维生素D的准确性，推荐采用质谱法进行维生素D的检测，尤其是维生素D2补充人群。

5、质谱方法学推荐：《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》[8]是以25-羟基维生素D检测为实例介绍LC-MS/MS方法验证的关键要素，为LC-MS/MS技术临床应用方法的建立、验证和实施提供参考。人群维生素 D 缺乏筛查方法[12]也将液相色谱串联质谱法作为第一法。《维生素D及其类似物的临床应用共识》[2]指出液相色谱与质谱串联分析能够区分25(OH)D3、25(OH)D2及其他与25(OH)D分子结构相似的物质，所以该检测方法的特异性最高，且灵敏度也极高，可认为是25(OH)D检测的“金”标准。《液相色谱-质谱临床应用建议》[9]指出与免疫方法相比，LC-MS更适合用于维生素的定性、定量检测。

同时测定维生素D2和D3的临床价值

针对维生素D水平评估，国内外众多指南建议：维生素D水平＜20ng/mL为缺乏状态;

血清中25-(OH)D水平应维持在30ng/ml以上。

英盛生物25-羟基维生素D(D2/D3)

检测试剂盒

与传统液液萃取等样本前处理方法不同，该试剂盒基于SLE（固体支撑液液萃取）样本前处理方法，可对25-(OH)D2及25-(OH)D3有效稳定萃取，精准检测。

有以下优势：

■ 只需上样、洗脱步骤，不再需要传统液液萃取的上盖、混匀、离心、取上清等繁琐的操作；

■ SLE板萃取效率更高，萃取更稳定，在避免乳化问题的同时，保证检测结果的准确性及可靠性；

■ SLE板可有效去除磷脂及蛋白质等杂质，有效保护色谱柱和质谱仪器。

总之，简单操作即可轻松获得更干净、更高回收率、更稳定的提取物。

英盛生物在维生素临床检测领域具有高品质、多选择性检测试剂，适用于市面主流临床质谱检测平台，全面助力临床维生素精准检测，科学补充。

参考文献：

1.中国老年学学会骨质疏松委员会维生素Ｄ学科组专家委员会. 维生素Ｄ与成年人骨骼健康应用指南（2014年标准版）[J].中国骨质疏松杂志 2014年９月第２０卷第９期

2.中华医学会骨质疏松和骨矿盐疾病分会.《维生素D及其类似物的临床应用共识》[J].中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志 2018年1月第11卷第1期

3.Francis R，Aspray T，Fraser W，etal . Vitamin Dand bone health : apractical clinical guideline for patient management.

4.顿中华. 维生素D检测方法的研究进展[J]. 华夏医学, 2016, 29(4):171-176

5.Songlin Y, Xinqi C, et al. 25-(OH)D analogues and vacuum blood collection tubes dramatically affect the accuracy of automated immunoassays Scientific Reports[J]. 2015; 5: 14636

6.禹松林, 方慧玲等. 五种自动化免疫学方法和液相色谱串联质谱方法测定25羟维生素 D 的比较[J]. 中华检验医学杂志, 2015, 38(7):475-479

7.Songlin Y, Ruiping Z, et al. Is it necessary for all samples to quantify 25-(OH)D2 and 25-(OH)D3 using LC-MS/MS in clinical practice?[J] Clin Chem Lab Meb. 2018, 56(2): 273-277

8.中国医师协会检验医师分会临床质谱检验医学专业委员会.《液相色谱串联质谱临床检测方法的开发与验证》[J].《检验医学》2019年 第3期

9.中华医学会检验医学分会，卫生计生委临床检验中心.液相色谱-质谱临床应用建议[J]. 2017,40(10)

10.Michael F. Holick, Neil C. Binkley et al. Evaluation, Treatment, and Prevention of Vitamin D Deficiency: an Endocrine Society Clinical Practice Guideline [J].J Clin Endocrinol Metab, July 2011, 96(7)

11.中华医学会儿科学分会儿童保健组、《中华儿科杂志》编辑委员会.儿童微量营养素缺乏防治建议[J].《中华儿科杂志》2010年48卷7期

12.WS/T 677—2020人群维生素D缺乏筛查方法

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