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为什么别人的Western Blot数据不被质疑?!

美国ProteinSimple公司
2018.9.03

过去的一段时间里,Western blot数据被修饰,修改,拼凑,重复使用等问题,导致数据可信度遭质疑,从而文章撤稿,基金撤回,成为中国科学家内心隐隐的痛。 

Simple Western系列全自动定量western blot系统,可以很好的解决这些问题。

      I.      数据不可修改

 Simple Western Compass软件,符合FDA21 CFR part 11审计追踪法规要求,保障数据不可修改,全程实验及结果可溯源。

     II.      全程自动化标准化

很多科学家重复使用Western Blot数据,是因为同一实验重复性差,万般无奈,只能将不同次实验拼接在一起。Simple western全程自动化标准化,实现数据可重复,无需再拼凑实验结果。

    III.      全膜western

为避免作者通过剪膜来修改western blot结果,现越来越多的杂志,需要作者提供全膜的原始结果。而全膜孵育抗体,将会大幅度提高传统western blot抗体消耗,增加成本。Simple Western所有实验均为全膜western,且通常只需消耗0.1-0.2ul抗体原液,大幅降低抗体成本消耗。

 

现分享最新发表在国际顶级期刊Nucleic Acids Research的文章:Combined deficiency of Senataxin and DNA-PKcs causes DNA damageaccumulation and neurodegeneration in spinal muscular atrophy,作者来自美国德克萨斯理工大学健康科学中心医学院。

慢性,低水平运动神经元生存基因(survival motor neuron (SMN))是导致脊髓性肌萎缩(SMA)的重要因素。作者建立SMN缺失模型研究SMA发生的分子机制。文章中进行了大量的western blot实验。

结果:

1. 急性SMN缺失,引起非SMA分裂细胞DDR信号通路活化。

2. 急性SMN缺乏导致非SMA分裂细胞SETx的下调和RNA - DNA杂合物(R环)的积累。

3. 病人数据。慢性低水平SMN可引起SMA患者来源细胞SETX和磷酸dna-pkcs缺乏,R-环积聚和DNA损伤。

4. SMN或SETX在SMA患者细胞中的异位表达减少R-环积聚和挽救DNA损伤表型。

5.慢性低水平SMN可导致SMA小鼠脊髓神经元SETX缺乏、R-环积聚和DDR通路激活

6. SMN和SETX异位表达挽救SMA脊髓神经元DNA损伤和神经元变性

文中,作者检测17个蛋白,包括内参蛋白Tubulin(55KD),SMN(40KD),DNAPKcs(450KD)及其磷酸化,CHK1(56KD)及其磷酸化,ATR(300KD)及其磷酸化,CHK2(62KD)及其磷酸化,BRCA1(220KD)及其磷酸化,ATM(350KD)及其磷酸化,H2Ax(15KD),rH2AX(15KD),SETX(35KD)。

涉及多个200KD以上大分子量蛋白,和H2Ax小分子量蛋白检测。众所周知,大分子量蛋白质和小分子量蛋白质,是传统Western Blot技术的难题。

作者在补充材料中提供了所有蛋白的全膜western blot结果。举几例:

Simple western作为新一代western blot技术,实现了结果可重复,全膜,2-440KD全覆盖,全程自动化,化学发光信号值定量,数据不可修改,这些是传统western blot技术的瓶颈。

Cell:基于胃癌病人细胞建立类器官库并研究胃癌发生发展机制

辉瑞制药最新PNAS文章:定量Western blot研究蛋白水解靶向嵌合分子(PROTACs)机制

Nature Genetics:连接非编码突变和肿瘤基因表达的全转录组网络

Cell Stem Cell使用Wes定量研究胰腺癌发生关键蛋白GATA6

Wes:精准定量蛋白质表达分析技术用于血小板稳态研究

Wes再登免疫学顶尖杂志Immunity

如需了解更多Simple western技术,请联系ProteinSimple中国

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