在进行神经组织或相应细胞系的 Western 实验时，什么样的内参（loading control）才是更合适的？当然，常用的管家蛋白如 GAPDH、β-tubulin、β-actin 依然是研究者的首选内参。然而，我们需要注意的是这些管家蛋白表达水平在神经相关组织中是容易发生变化的，在使用前需要进行严格的验证。例如，作为细胞骨架的 β-tubulin 或 β-acti n在神经元细胞分化过程中就会发生变化（文献1）。
因此，如果我们贸然使用不经验证的管家蛋白就可能会造成结果的不准确。
为确认什么样的内参更适合以神经细胞或组织作为样品的 Western 内参，魁北克大学 Lussier 实验室详细研究了小鼠不同脑组织部位的管家蛋白表达情况。特别比较了年龄为7个月（对照）和22个月（老年）小鼠的蛋白脑组织部位的表达情况（文献2）。
研究者发现，在多个亚组织部位（如粗突触体、含有突触小泡的 LP1 上清液、突触后密度），β-tubulin 与 β-actin 都发生了明显变化。这种情况下，如果继续使用 β-tubulin 与 β-actin 作为 Western Blot 实验内参，则会带来误导性的定量结果。
（P2：粗突触体；LP1：突触体膜；PSD：突触后密度）
这样的结果并不出人意外，作为细胞骨架的 β-tubulin 与 β-actin 是树突组织的主要成分，对于维持树突棘形态、组织 PSD 及锚定/稳定突触后体至关重要。而正常衰老会差异性的改变构成神经元结构元素的动态分子实体，如 β-tubulin 与 β-actin 的表达。
而与 β-tubulin 及 β-actin 不同的是，Stain-Free 所获得的总蛋白在小鼠衰老过程中的不同亚组织部位表达量相对恒定，作为内参，可以获得更精准的 Western 定量结果。
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参考文献：
1.Biochemical fractionation of brain tissue for studies of receptor distribution and trafficking. Current protocols in neuroscience Chapter
2.Quantitative Immunoblotting Analyses Reveal that the Abundance of Actin, Tubulin, Synaptophysin and EEA1 Proteins is Altered in the Brains of Aged Mice. Neuroscience
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