生物制药工艺过程中，相关蛋白类杂质的鉴定和定量，对于证明药物的质量、疗效和安全性至关重要。这些杂质通常来自于生产细胞系、试剂和在整个细胞培养/维护或下游加工过程中使用的成分。未被检测到的残余蛋白在体内可被识别为外来抗原，从而引发潜在的致命免疫反应。此外，微量的过程特异性试剂或成分可能会改变产品的稳定性和降低治疗效果.因此，鉴于潜在杂质源或类型的范围、杂质在微量中的存在以及其存在的样品的复杂矩阵，准确地检测杂质是必要的，但也是复杂的。
在本技术指南中，我们着重于准确检测治疗蛋白和疫苗开发过程中可能存在的四种候选污染物：宿主细胞蛋白(HCP)、蛋白A、绿色荧光蛋白(GFP)和牛血清白蛋白(BSA)。目前评估这些残留物浓度的方法，如酶联免疫吸附试验(ELISAs)、流式细胞术和传统的Western blotting等，都是劳动密集且容易出错的。这些传统方法由于缺乏获得综合污染物剖面所需的特异性和灵活性也可能产生误导。
Simple Western 以其全程自动化，程序标准化，结果精准，化学发光信号值绝对定量，软件符合FDA 21 CFR Part 11等优势获得全球生物制药企业的青睐。
Merck疫苗研发中心 Simple Western 重复性评价
应用一、宿主蛋白残留（哺乳动物细胞CHO）
样品： HCP Control Antigen Lysate (Cygnus Technology, PN F553X) 0.037ug/ml至1ug/ml
抗体： Biotinylated Goat anti CHO HCP antibody (Cygnus Technology, 3G-0016-AFB)
仪器： Peggy Sue （ProteinSimple）
方法： IEF，两性电解质 Premix G2 pH3-10 with PI ladder，Biotinylated Goat anti CHO HCP antibody 抗体孵育1小时，二抗 Streptavidin-Horseradish Peroxidase (HRP) conjugate 30 minutes
结果：
应用二、 宿主蛋白残留（细菌）
样品： 大肠杆菌Control Antigen Lysate (Cygnus Technology, PN F417) 100ug/ml至1.23ug/ml
抗体：anti-E.Coli HCP antibody (Cygnus Technology, F117-PA)
仪器： Wes （ProteinSimple）
方法： 分子量分离免疫检测
应用三、 Protein A
样品：Protein A short and long forms (Novus Biologicals, NBP2-34964 and NBP2-34966, respectively)，400 pg/mL to 25 pg/mL
抗体： Protein A antibody from R&D Systems (PN MAB99761)
仪器： Wes （ProteinSimple）
方法： 分子量分离免疫检测
应用四、 绿色荧光蛋白GFP
样品：jellyfish GFP (Novus Biologicals, NBC1-22949)，HEK 293 lysate，express various recombinant proteins fused to GFP
抗体：anti-GFP antibody (R&D Systems, PN AF4240)
仪器： Wes（ProteinSimple）
方法： 分子量分离免疫学检测
结果：
应用五、牛血清白蛋白 BSA
样品：BSA protein reference standard ampules (ThermoFisher, PN 23209)
抗体：anti-BSA antibody (Bethyl Laboratories, PN A10-127A)
仪器： Wes and Peggy Sue（ProteinSimple）
方法： 分子量分离免疫学检测
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