撰文 | 龙志敏
随着近年来发生了多起因基因毒性杂质导致药品召回的事件,基因毒性杂质逐渐走进了大家的视野。根据致突变性和致癌性,人用药品注册技术要求国际协调会议(简称ICH)签发的M7指南将基因毒性杂质主要分为5类,根据类别的不同,依照决策树(图1.)进行毒理学关注阈值( Threshold of Toxicological Concern, 简称TTC)或者常规杂质进行控制。
图1. 基因毒杂质分类及控制决策树
因为基因毒性杂质种类繁多,通常情况下采用警示结构来区分普通杂质和基因毒性杂质,是个快速而高效的方法,Ashby等[1]总结提出了多种警惕结构的模型,并将这些结构特征整合到一个超级致癌物的分子模型中(图2.)。
图2.超级致癌分子模型
随着中国加入ICH,对于药品创新和质量的理念不断与国际接轨,对基因毒杂质的控制显得愈发重要,国家药典委员会官网([2],见下图)也于今年发布了 “遗传毒性杂质控制指导原则审核稿”,基因毒性杂质检测日益成为药品申报和日常质控不可或缺的内容。
因此,SCIEX公司利用LC-MS/MS开发出多种基因毒性杂质方法,目前已经涵盖磺酸酯类、亚硝胺类、香豆素类、叠氮类、硝基苯-吗啉、氨基-硝基苯类、亚硝基芳香类、氮丙啶类、偶氮化物类、芳胺酰类、芳胺类、不饱和酮类、丙磺酸内酯类、烷基或苯基磷酸脂类等数十类基因毒检测方法。灵敏度可充分满足TTC或PDE灵敏度的需求。
图3.超级致癌分子模型中十四类基因毒杂质TD50灵敏度评估
例如,在新的基因杂质N-亚硝基-N-甲基-4-氨基丁酸(NMBA)的召回事件发生后,SCIEX第一时间开发了基于SCIEX LC-MS/MS的超高灵敏度的NMBA检测方法。方法如下:
色谱柱:Phenomenex Kinetex F5 (100*3.0 mm, 2.6 µm)
流动相:A相:水(0.05%甲酸) B相:甲醇(0.05%甲酸)
流速:0.6 ml/min
进样量:10 µL
梯度洗脱:7min
离子源:APCI源,正离子模式
离子源参数:
NC电流: 3 µA 气帘气 CUR: 15 psi 雾化气 GS1: 35 psi
碰撞气 CAD: low 源温度 TEM: 350 ℃
Compound
Q1Q3DPCE
CXP
NMBA
147.1
117.2
2996
实验结果
图4:LLOQ 0.01 ng/ml的提取离子流图,在0.01-20 ng/mL线性范围良好
SCIEX三重四极杆质谱技术,配备耐用性广受业界认可的Turbo VTM离子源,拥有在极低浓度下仍能保持准确度和重现性的脉冲计数检测器,以及符合FDA 21 CFR Part 11要求的软件。在微量基因毒杂质检测中,面对高浓度药物主成分可能存在的干扰,仍能维持稳定,高灵敏度的检测结果。
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文献:
[1] ASHBY, TENNANTRW. Chemical structure, Salmonella mutagenicity and extent of carcinogenicity as indicators: carcinogenesis among 222 chemicals tested I rodents by the U.S. NCI/NTP[J]. Mutat Res, 1988, 04(1):17-115
[2] 国家药典委员会官方网站http://www.chp.org.cn/view/ff808081687448ca01687881b153072b?a=BZFL