超高效液相进样器分为FTN与FL两类。H-Class与部分I-Class仪器使用FTN进样器,经典款UPLC和部分I-Class仪器使用FL进样器。
上一期 《仪器维护那些事儿》与大家分享了FTN进样器的常见问题与处理方法,本期我们一起看一下FL进样器吧!
FL全称为Fixed Loop,即固定定量环型。它有不充满定量环(使用针溢出,默认进样模式)、不充满定量环和充满定量环3种进样模式。根据定量环体积差异,每种模式均有各自推荐的进样体积范围。
三种进样方式在不同定量环下推荐的进样体积范围表:
定量环体积 | 不充满定量环(使用针溢出)模式 (µL) | 不充满定量环模式 (µL) | 充满定量环模式 (µL) |
1 µL | 0.2 – 0.75 | 不推荐 | 1 |
2 µL | 0.4 – 1.5 | 不推荐 | 2 |
5 µL | 1.0 – 3.8 | 不推荐 | 5 |
10 µL | 2.0 – 7.5 | 2.0 – 5.0 | 10 |
20 µL | 4.0 – 15.0 | 4.0 – 10.0 | 20 |
50 µL | 10.0 – 37.5 | 10.0 – 25.0 | 50 |
100 µL | 20.0 – 75.0 | 20.0 – 50.0 | 100 |
250 µL | 40.0 – 150.0 | 40.0 – 125.0 | 250 |
建议按照推荐表使用,否则峰面积重现性可能会达不到理想状态。
FL与FTN工作原理完全不同,其样品流路处于低压体系中。
FL进样器流路图
为防止扩散效应,吸样前会先吸取小段空气,吸样后再吸取一段空气,样品两端的气泡将样品与针内溶剂(弱洗液)进行隔离。完成上述步骤后进样针进入清洗台密封圈,样品流路形成密闭环路,弱洗溶液自下而上推动液流产生约150 psi压力将气泡压缩并推动样品至六通阀。因此,环路密闭与充满液体是进样器正常工作的前提。
压力辅助进样过程图
日常使用中,FL最常见的报错就是”样品压力低”(Sample Pressure Low),即无法压缩产生约150 psi的压力。由进样工作原理我们非常容易找到可能的故障原因:1)弱洗注射器未充满液体 2)进样针弯折 3)密封圈磨损。
针对上述常见问题我们建议用户:1)使用前充分灌注注射器,保证充满液体。2)使用预开口进样瓶,防止针扎弯 3)清洗溶剂避免添加缓冲盐,防止盐析磨损密封圈。
Tips
1)进样针与密封圈属于易损易耗件,建议定期更换。
2)强洗溶剂一般使用高比例的有机相。
3)弱洗溶剂一般使用高比例的水,成分与流动相初始比例接近,否则可能会导致峰前延。
相关阅读:
仪器维护那些事 | 如何排查Alliance峰面积重现性差(二)