沃课堂 | 液相故障排除之Alliance系统进样重现性

下图是Alliance系统进样器的流路示意图，通过三个阀的切换，完成样品的进样。由图中分析，问题可能出现在3个地方。

1.1 观察进样器是否有气泡或漏液

遇到进样重现性不好的时候，首先打开Alliance面板旁边的小门，检查注射器是否有气泡或漏液，如注射器漏液需报修，请工程师更换；如果有气泡需按以下操作排气泡。

每天做实验前，Alliance系统需要四步操作。

选择已湿灌注的管路，进行Purge Injector操作。如果流动相中含有缓冲盐，长时间运行之后，需灌注注射器。灌注溶液时先用100%纯水，再使用100%纯甲醇或乙腈-水（50：50）。选择已完成湿灌注的管路。在Alliance系统面板上选择“Menu/Status”，点击“Direction Function”，选择“Purge Injector”。

一般选择6倍loop环体积的液体量进行灌注清洗，设完后，点击“OK”即可。Purge时应观察注射器内气泡是否排除。

1.2 进水称重

峰面积的重现性不好可能是进样器引起的，如果怀疑进样量不准，可以用称重法来检验。进样前建议先清洗注射器2～3次，清洗过程中确认注射器无气泡、不漏液，以甲醇为流动相，平衡至压力平稳。用样品瓶装满水，先称重量，然后连续进6针50ul水再称重，如果重量没有变化，说明样品没吸进去。连续做6次，如果6次失重的%RSD大于2，说明进样系统可能有问题。

1.3 做针密封校正

如果确认没有气泡，并且V1和V3阀没有漏液，可以考虑对Alliance系统的针密封系统进行校正（seal pack测试）。

做seal pack测试前，需要接上色谱柱，以100%甲醇为流动相，1.0 ml/min的流速运行至压力稳定（1000 psi左右），按以下步骤进行操作：在Alliance面板上选择“Diag”选项卡，点击“Adjust Seals”，重复做两次，如果结果一致，保存校正结果。

确认密封件数据值 （顶部、底部和宽度）在下表所示的可接受范围内。

adjust seal结果可接受的数值范围表

如果“adjust seal”调试失败，请打电话报修，由工程师上门进行维护。

色谱方法原因主要包括三个方面：色谱柱，样品瓶中的样品量不够，以及由于基线波动较大，积分不准确造成重现性较差。解决办法如下。

2.1 色谱柱原因

由于色谱柱使用时间过长，造成柱效下降，引起色谱峰拖尾，所以导致峰面积重现性不佳。首先考虑是否是由于色谱柱引起，可以用标准品进行柱效测试或更换色谱柱进行检查。

2.2 样品瓶装载合适的样品量

Alliance系统的进样针为侧面抽吸设计（图a），因此需要样品瓶溶液的量要足够，尤其是在做大体积多针重复进样时，需要保证样品体积在1.0至1.5mL左右（图b）。

图a. Alliance系统使用的进样针，为侧面抽吸设计。图b. Alliance系统进样针进样位置的示意图。样品装液量需高于0.5 mL刻度线。但是不能完全装满，以免造成吸样精度不准确。

2.3 基线波动较大引起峰面积重现性差

在积分的时候，由于基线噪音较大，会造成积分起点及终点的不一致，导致峰面积相差较大，故重现性较差。

对于Alliance系统可能出现的重现性问题，应该按照从简到难的顺序，依次检查样品瓶、注射器、色谱柱、液相方法等因素，在确定对系统硬件进行检查没有问题的基础上，再排查方法问题。每次开机后，为保证重现性，一定要做“purge injector”，保证进样注射器中没有气泡。

当所有能做的检查做完后仍然不能判断出故障时，请致电800-820-2676（座机），400-820-2676（手机），请工程师上门解决。