干货来袭
给你想要的data！
论如何做好一个wb的实验
进入金秋了。。。。。
丝丝凉意让人身心舒爽，但是！一看到各种面目可憎的WB条带，瞬时愁眉苦脸，有木有！有木有？
别怕，有我们GE技术大咖来咯。。。为大家罗列出常见的WB实验问题（不完全统计），帮大家开开心心过金秋，圆圆满满收data啦~
问
我的检测结果为啥没有信号或者信号很弱？
答
1
可能的原因1：转移蛋白失败或者效率太低
解决方案
a.印迹过程，冷凝效果不好导致高温产生了气泡，或者胶/膜变行等情况从而影响了转印效率。
b.优化丙烯酰胺浓度/转移时间/电流。
c.重新检查印迹过程：使用染料对胶和膜染色来检测或使用预染的彩虹marker来帮助监控转印的过程。
2
可能的原因2：检测系统
解决方案
a.推荐使用斑点印迹系统检测抗原与一抗结果，并筛选合适的浓度。对于一抗的优化，我们推荐起始浓度可以按照1:100,1:500,1:1000,1:5000稀释。
b.低亲和力的一抗：使用无Tween的溶液。
c.独立点膜，验证二抗与发光液预混后曝光，应可清晰看到膜上点，否则请检测二抗效价或发光液效果。
3
可能的原因3：样本上样量不够，信号过低
解决方案
a.增加上样量或上样前浓缩样本。
b.使用灵敏度更高的检测体系（GE Amersham ECL prime/Amersham ECL Scelect高灵敏度化学发光检测试剂以及GE Amersham imager 680超灵敏多功能成像仪）
c.延长曝光时间（1~2小时）。
4
可能的原因4：蛋白与膜结合较弱
解决方案
a.转膜缓冲液中的SDS可以提高难溶解蛋白的转印效率，但是也会降低蛋白和膜的结合效率，可以降低SDS含量或者不使用SDS。
b.使用新换的膜以确定正确的水合作用。
这绝对就是广告!
附上常见发光液选择和膜的选择
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