整个暑假都在追奥运，今天女排大破荷兰队，闯进了决赛，我的女神好厉害，我都热泪盈眶了。
实验室
小丸子
实验室
花轮
光顾着看奥运，要开学了，你的实验都做好了吗？老板催得紧啊...
做是做了，可是His 标签蛋白纯化效果不理想，宝宝心里苦呀~~o(>_<)o ~~
实验室
小丸子
GE小编
别着急，今天GE来跟大家一起找找原因！
纯化所得组分中
为何没有重组的His标签蛋白？
本期我们想跟大家分享的一个常见问题是：纯化所得组分中没有收集到重组的His标签蛋白。该问题主要可以分为以下两个方面：
一方面
若His标签蛋白没有结合到填料上就流穿了
原因1
超声的功率不对
超声功率过高，容易导致蛋白炭化；功率过低，蛋白释放不出来。
建议：改变超声功率，同时可以在超声前加入溶菌酶。
原因2
结合缓冲液条件不合适
建议：检查结合缓冲液中是否有影响结合的因素，如：金属离子螯合剂、强还原剂、过高的咪唑浓度。pH的改变也会对结合效果有影响，可以摸索不同的pH条件，可能会收到意想不到的效果。
原因3
His标签没有表达或丢失或暴露不充分
建议1：用anti-His的抗体进行WB，检测His标签是否存在。
建议2：将蛋白用4-6M盐酸胍或4-8M尿素变性后，让His标签充分暴露出来，看是否能与填料结合。
建议3：改变His标签的位置或者增加其数目（常用6-10个His），增加暴露和结合机会。
建议4：改变金属结合离子，除了Ni2+，Cu2+、Zn2+、Co2+也可以用来进行His标签的捕获。
另一
方面
若His标签蛋白结合了，但是洗脱不充分
原因1
洗脱条件太温和
建议：增加咪唑的浓度或选择咪唑线性梯度洗脱，或者通过降低pH寻找最佳洗脱条件。需要注意的是，pH低于3.5容易导致镍离子脱落。
原因2
蛋白柱上沉淀
建议1：降低蛋白浓度。可以减少上样量，或者采用咪唑线性而非步级梯度洗脱，增加蛋白稀释度。
建议2：使用去污剂或者改变NaCl的浓度，或者使用变性剂（4-6M盐酸胍或4-8M尿素）在变性条件下洗脱。
原因3
非特异性的疏水或者其他相互作用
建议：加入非离子型去污剂到洗脱缓冲液（如：2% Triton X-100）或增加NaCl的浓度洗脱。
下期预告
以上，是小编为大家寻找的一些可能的原因，也欢迎大家来信分享你们的纯化小经验。下期，我们将会继续与大家分享His标签蛋白纯化小贴士（二），期待您的关注。
GE小编
要开学了，哥才不会告诉你我家的His标签蛋白纯化产品正在火热促销，
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