尺寸排阻色谱 (SEC) 是生物制药质量控制中用于分析mAb聚集体 (HMW) 和片段 (LMW) 的标准方法。一直以来，人们都是使用25 nm孔径的硅胶基质固定相来分析常规单克隆抗体。但是，对于一些新型抗体，例如双特异性T细胞抗体、抗体细胞因子融合蛋白等，分子量要远高于常规抗体，因此需要稍大孔径的色谱柱才能精确分析其中的高分子杂质。
TSKgel UP-SW Aggregate是UP-SW系列硅胶基质SEC色谱柱中的最新产品，其孔径为30 nm，专为分析超大分子蛋白质和高阶抗体聚集体而设计。
本应用展示了UP-SW Aggregate色谱柱在测定大分子免疫球蛋白IgM的HMW杂质以及常规mAb的高阶聚集体时优异的分离性能。
mAb二聚体及聚集体的分析
我们比较了UP-SW系列的两款色谱柱，UP-SW3000 (与著名的G3000SWXL色谱柱具有相同孔径) 和UP-SW Aggregate (孔径更大) 对单克隆抗体HMW和LMW杂质的分离情况，发现UP-SW3000可以很好地分离HMW和LMW杂质，而UP-SW Aggregate则可以更精确地观察高阶聚集体的分布情况。
人血清中IgM单体和聚集体的分离
图2是使用UP-SW3000和UP-SW Aggregate色谱柱分析人免疫球蛋白IgM的谱图。IgM的分子量远高于IgG，因此UP-SW3000无法分离IgM的单体和多聚体，而UP-SW Aggregate可以确定IgM聚集体的含量。
mAb热聚集的分析
图3是使用UP-SW Aggregate色谱柱分析热变性mAb的结果。先用20 mmol/L磷酸钠缓冲溶液,pH 7.2+150 mmol/L氯化钠将mAb样品稀释10倍，然后等分分装。随后将各等分样品分别在70℃、73℃、77℃以及80℃下保存2小时，使形成mAb聚集体。随着温度的升高，高阶聚集体的含量也会随之增加。在70～80℃之间，可以清楚地分辨出四个不同温度点下聚集体峰曲线的变化。
TSKgel UP-SW Aggregate是UP-SW系列SEC色谱柱中孔径最大的一款色谱柱，是分析分子量高于标准IgG的生物分子以及高阶聚集体的理想选择。
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