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Flash (过柱机) 可以完成大分子(>4KDa)化合物的分离吗?

Biotage
2020.11.11

随着整个社会研发的投入和发展,药物的发展正以不可阻挡的势头前进,Bioatge一直着力于加速药物分子前期研发,帮助提高前期药物分子合成和筛选的速度,我们为您提供最先进的合成技术以及纯化方案。

目前国内的药物发现,不管是大分子还是小分子,都是风头正劲。Bioatge快速纯化系统往往是小分子合成领域的首选产品,皮实可靠的性能,满足了国内各类小分子前期药物发现的需求,关于本文标题的回答,答应是肯定的,除了小分子的分离和纯化,Bioatge快速纯化系统也可应用于大分子药物的分离,此次我们将和您分享:通过Biotage最新款Selekt系统实现大分子聚乙二醇药物前体的分离。

此大分子为以聚乙二醇为基底的离子型化合物,分子量范围在5KDa左右,因此我们选用了凝胶作为此次大分子分离的填料,提前准备好的凝胶填料如图1:


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使用方法很简单,仅需要将预处理好的填料慢慢转移至BiotageSfar 色谱柱即可,下图即为装填过程中和装填后的色谱柱:

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另一方面,由于此次样品为聚乙二醇基质,几乎没有紫外信号,因此我们选用了外置检测器-ELSD蒸发光散射,这是解决紫外信号弱或者没有紫外的常规方法,或者您还可以外置质谱检测器,Biotage作为全球首家推出Flash-Mass联用系统的厂家,可为您带来前所未有的精确分离体验。

在样品准备好之后,一切准备就绪。
色谱柱大小:Sfar 25g

上样量:100mg

在开始分离方法之前,我们发现此样品需要用到三种不同的流动相体系。分别是:去离子水,碳酸氢铵水溶液和氯化钠水溶液,Selekt拥有4种溶剂管路,同时在一种方法中可以支持多种洗脱体系来回切换,因此在一个方法中,Selekt可以支持四种不同的溶剂进行混合配比,这样的功能可以让此次实验变得异常简单。

以下实际实验设备图:

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Selekt ELSD检测器连接后如下:

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以下为方法的洗脱流程:首先使用去离子水将色谱柱冲洗干净,随后进样,平衡一段时间后,以碳酸氢铵水溶液/去离子水=2:98 的比例洗脱第一个样品;结束后再切换到2M NaCl水溶液进行洗脱,将剩下的样品洗脱出来。

方法结束后,我们得到了下面的实验谱图报告:

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此图中纵坐标为信号响应强度,横坐标为所消耗溶剂量,红色和蓝色的线分别代表了两种紫外波长下的信号,可见几乎没有信号,绿色的则是代表蒸发光散射的信号,在连接了蒸发光检测器之后,系统有了很好的出峰表现。

在成功完成了第一种样品的分离的尝试之后,我们使用同样的方法对另外一种类似物也进行了分离尝试,得到的结果如下:


 

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第二次尝试的方法中,我们没有将去离子水冲色谱柱的过程体现在报告中,只展示了出峰情况,上下两图对比可以发现,两种样品的出峰情况基本一致,信号强度也比较接近。

在拿到所有纯化后的样品的馏分后,我们进行了TLC检测,可以得到很纯的独立单点,由于此次纯化为帮助客户所进行的分离尝试实验,涉及到一些商业机密,因此我们对一些样品信息以及后续的LC-MS测定进行了保密工作,最终得到的样品纯度也得到了客户的认可。

从以上的纯化实验,我们可以发现,Biotage中低压纯化系统(SelektIsolera)不仅支持小分子化合物的分离,同时也可以帮助一系列大分子化合物的分离纯化,为您的实验研发提供更多更广的解决思路和方案。

关于大分子的Flash分离,欢迎留言和我们一起讨论。

 

 

 

 


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