瘦肉精是指能够促进瘦肉生长的饲料添加剂。任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”，主要包括盐酸克仑特罗、莱克多胺、沙丁胺醇等β-受体激动剂的药物。猪、羊等摄入“瘦肉精”后能加速成长、提高出肉率，但“瘦肉精”后会在动物组织内形成残留，消费者后直接危害体健康。我国在2002年就已经严禁“瘦肉精”作为兽药和饲料添加剂。2021年央视3.15晚会曝光，河北省青县肉羊养殖户违禁使用“瘦肉精”，导致瘦肉精羊流向多地，严重危害消费者健康。
本实验依据由农业部发布的国家标准《猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法（农业部1025号公告-11-2008）》和农业行业标准《动物尿液中11中β-受体激动剂的检测（农业部1063号公告-3-2008）》，采用莱伯泰科全自动固相萃取仪SPE 1000对尿样进行净化，MultiVap-10平行定量浓缩系统浓缩后用液相色谱质谱检测。该方法能够高效、稳定地达到实验的要求，可以提供领域范围内的良好应用。
1.1仪器设备
SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）：ABSCIEX Triple Quad 4500液相色谱-串联质谱仪（LC-MS/MS）；MultiVap-10多通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）。
SPE1000 全自动固相萃取仪
MultiVap-10 全自动平行浓缩仪
乙腈（色谱纯）；甲酸（色谱纯）；异丙醇-乙酸乙酯：（6+4，V/V）；5%氨水甲醇溶液：取5mL氨水与95mL甲醇混合； 0.2%甲酸水溶液：取甲酸1mL，加水定容至500mL；含5mM甲酸铵和0.1%甲酸水溶液：称取5mM甲酸铵和1mL甲酸，加水定容至1L；乙酸铵溶液（2 mol/L）：称取15.4g乙酸铵，溶解于100mL水中，用适量乙酸调pH至5.2；氢氧化钠溶液（5 mol/L）：称取氢氧化钠10g，溶于50mL水中；氯化钠（分析纯）；β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶；β-受体激动剂混标工作液：1mg/L，溶剂为甲醇；固相萃取柱（PXC 500mg/6mL）。
2.1尿样样品前处理
2.1.1酶解
准确量取5mL尿样于50mL离心管中，加入0.5 mL 2 mol/L的乙酸铵缓冲液(pH=5.2），加入40μLβ-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶，漩涡混匀，37℃避光水浴震荡16 h。
2.1.2 提取
酶解后，将待测样品用10000 rpm离心10 min，取上清液与另一50 mL离心管内，用5 mol/L NaOH调节pH值至9.8，加入10 mL异丙醇-乙酸乙酯，加入约2 g固体氯化钠，漩涡震荡10 min，5000 rpm离心10 min。以10 mL异丙醇-乙酸乙酯再次提取，合并两次上清液于50mL浓缩杯中。
2.1.3浓缩
将浓缩杯置于MultiVap-10中，50℃氮吹至干，然后用5 mL 2 mol/L乙酸铵溶液溶解，待净化。
2.1.4净化
将样品放入SPE 1000全自动固相萃取系统，检查溶剂量和气路密封性完好，并将PXC固相萃取柱放入相应萃取通道。
按照图1所示的方法进行SPE 1000固相萃取方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。
收集的洗脱液用MultiVap-10 50℃氮吹至干，然后用0.2%甲酸水溶液溶解、
定容至1mL，0.22 μm滤膜过滤，高效液相色谱-串联质谱仪分析。
图1固相萃取净化方法
2.2 分析步骤
2.2.1液相条件
色谱柱：Phenomenex KinetexC18 4.6×100 mm 2.6 μm ；
柱温：40℃；
流速：0.6mL/min；
进样量：10μL；
流动相：A相：含5mM甲酸铵和0.1%甲酸水溶液；B相：乙腈
梯度条件：见表1。
表1. 梯度条件
2.2.2 质谱条件
离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；电喷雾电压：5500V；雾化气压力：50psi；辅助气压力：60psi；离子源温度：550℃；采集方式：多反应监测（MRM），质谱参数见表2。
表2. 质谱参数
猪尿样品加标色谱图，见图2。
图2 猪尿样品加标色谱图
称量不含待测物组分的试样各5mL，分别添加三个浓度水平，每水平6个平行样。按照前面处理方法进行样品前处理，按照仪器条件进行测定。结果表明，不同基质分析方法的回收率为82.1%~103.2%，重复性RSD为3.5%~9.4%，回收率和重复性均较好，说明莱伯泰科SPE 1000全自动固相萃取仪、MultiVap-10多通道平行浓缩系统能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于猪尿中14种β-受体激动剂残留的样品前处理。
本方法基于国家标准《猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法（农业部1025号公告-11-2008）》和农业行业标准《动物尿液中11中β-受体激动剂的检测（农业部1063号公告-3-2008）》，采用莱伯泰科全自动固相萃取仪SPE1000对尿样进行净化，MultiVap-10平行定量浓缩系统浓缩后用液相色谱质谱检测。该方法能够高效、稳定地达到实验的要求，可以提供领域范围内的良好应用。
综上所述，莱伯泰科SPE 1000全自动固相萃取仪、MultiVap-10多通道平行浓缩系统能够高效、稳定地达到实验的要求，适用于猪尿中14种β-受体激动剂残留的样品前处理。
求，适用于猪尿中14种β-受体激动剂残留的样品前处理。
1、农业部1025号公告-11-2008 猪尿中β-受体激动剂多残留检测液相色谱-串联质谱法；
2、农业部1063号公告-3-2008 动物尿液中11中β-受体激动剂的检测液相色谱-串联质谱法。
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