前 言
氯霉素曾广泛用于治疗各种敏感菌感染，后因对造血系统有严重不良反应，故对其临床应用现已做出严格控制。氯霉素可用于有特效作用的伤寒、副伤寒和立克次体病等及敏感菌所致的严重感染。氯霉素在脑脊液中浓度较高，也常用于治疗其他药物疗效较差的脑膜炎患者。由于氯霉素可引起严重的毒副作用，所以建立一种高效、快速的定量流程及检测方法尤为重要。本文使用SPE1000全自动固相萃取系统对牛肉中的氯霉素进行固相萃取富集，用高效液相色谱质谱仪进行检测。
本文参考“农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法”采用SPE1000全自动固相萃取系统，测定氯霉素的回收效果，实验证明，氯霉素回收率在90.2%~99.5%之间，重现性RSD为3.5%，回收率和重现性良好，说明SPE1000全自动固相萃取系统可靠、稳定，适用于动物源食品中的氯霉素样品前处理。
关键词：氯霉素，SPE1000全自动固相萃取系统，液相色谱串联质谱，
SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；
SCIEX 4500 液相色谱串联质谱（SCIEX）；
氯霉素，100 mg/L，坛墨质检；
氯霉素D5，100 mg/L，坛墨质检；
氯化钠（分析纯）；
正己烷（色谱纯）；
乙酸乙酯（色谱纯）；
乙腈（色谱纯）；
C18固相萃取柱，（1000 mg/6 mL莱伯泰科）；
实验用水：超纯水。
取1 mL氯霉素标品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。
取100 μL 的氯霉素标准储备液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL标准工作液。
取1 mL氯霉素D5标品于10 mL容量瓶中，甲醇定容，配置成浓度为10 μg/mL的标准储备液。
取100 μL 的氯霉素D5标准储备液，用甲醇定容到10 mL，配制成0.1 μg/mL标准工作液。
取均质后的样品5g置于50mL离心管中，加入内标200μL，氯霉素标液200μL,加入乙腈5mL，4%氯化钠5mL，涡旋2min，4000rad/min离心10min，取上清液至另一个50mL离心管中，重复提取一次，合并提取液。提取液中加入正己烷5mL，涡旋2min，2000rad/min离心10min，弃去上层清液，重复一次，加入水饱和乙酸乙酯5mL，涡旋1min，2000rad/min离心10min，将上层液转移到15mL离心管中，重复提取一次，合并提取液氮吹至干，用水：乙腈（95:5）5mL溶解，备用。
同时做样品空白，加入内标200μL，剩下同样品处理 。
按照图1所示的方法进行SPE1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，氮吹浓缩至干，用1 mL流动相定容。
图1 氯霉素的SPE富集方法
液相条件：
色谱柱：C18，5 μm，4.6 mm*100mm；
流 速：0.2 mL/min ；
进样量：5 μL；
流动相：乙腈：水=40:60;
MS条件：
气帘气~40 CAD~9 TEM~150 GS1~40 喷雾电压-4500V
表1 氯霉素母离子/子离子(定量例子152.0)
图2为取200 μL的氯霉素标准工作液和200μL氯霉素内标工作液，用流动相定容到1.0 mL检测，氯霉素标品出峰色谱图，出峰时间为 1.50min。
图2 氯霉素标品出峰色谱图
图3氯霉素加标样品出峰色谱图，出峰时间为1.50min，图4为空白样品色谱图。
图3 氯霉素加标样品出峰色谱图
图4 空白样品色谱图
液质测定牛肉中氯霉素回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率在之间90.2%~99.5%，重现性RSD为3.5%。
表2 牛肉中氯霉素的加标回收率（加标量4 ug/kg）
结果与讨论
SPE1000全自动固相萃取系统净化的样品，其回收率在90.2%~99.5%,重现性为3.5%，准确度与平行性良好且自动化效率高，可应用于此类样品的前处理方法中。
农业部781号公告-2-2006 动物源食品中氯霉素残留量的测定 液相色谱—串联质谱法
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