（图片来源：包图网）
磷酸、醋酸以及液相分析中常用到的酸（常见的还比如甲酸，三氟乙酸等），他们的主要区别和选择在于：
各自的酸性不同
磷酸的酸性比醋酸强，就是说，磷酸可以把流动相的pH值调到更低。
紫外本底
有些酸有紫外本底，如甲酸，乙酸；有些没有，如磷酸。这样，在使用较低波长检测的方法时，就要考虑使用紫外本底小的酸。冰醋酸在短波长检测下应该慎用。
挥发性
有些酸是挥发性酸，如甲酸，乙酸，三氟乙酸等；有些不挥发，如磷酸。使用不挥发酸，流动相的pH相对稳定，而挥发性酸可能随时间造成流动相pH缓慢改变。但是，不挥发酸的不挥发性，限制了它们在液质联用时候的使用。
离子强度
酸的离子强度不同，离子强度在很多情況下影响被分析物的解离和性质，造成保留和峰型的改变，通常离子强度为： 三氟乙酸>磷酸＞甲酸>乙酸。离子强度很高的酸，通常会对液质联用产生强烈的抑制，如三氟乙酸，几乎可以让负模式扫描信号全部被抑制。
实例：甘草酸铵含量测定液相色谱分析，结构式：
1
方案一
使用初始方法浓度36.5%醋酸进行柱子筛选：
1）条件为：甲醇：醋酸：水=78：0.3：22，柱温30，流速1mL/min，
Ultimate® LP-C18 (4.6*250mm，5μm)，效果图：
序号 | 保留 时间 | 峰面积 | 相对 峰面积 | 塔板数 | 分离度 | 不对 称度 |
1 | 11.54 | 0.15 | 2.92 | 41312 | 1.81 | 0.99 |
2 | 12.22 | 5.21 | 97.08 | 8531 | n.a. | 1.16 |
总和 | 5.36 | 100.00 | 49843.00 | 1.81 |
分析：此条件下基本分离，但杂质靠近主峰。
2）改变流动相比例为甲醇：醋酸：水=75：0.3：25，柱温30，流速1mL/min，Ultimate® LP-C18（4.6*250mm，5μm)，效果图：
序号 | 保留 时间 | 峰面积 | 相对 峰面积 | 塔板数 | 分离度 | 不对 称度 |
1 | 13.44 | 0.03 | 0.74 | 6769 | 1.79 | 0.86 |
2 | 14.49 | 3.89 | 76.95 | 11753 | 2.28 | 1.27 |
3 | 15.72 | 0.11 | 2.20 | 13355 | 2.79 | 1.09 |
4 | 13.37 | 1.07 | 20.12 | 11716 | n.a. | 1.04 |
总和 | 5.05 | 100.00 | 43593.00 | 6.86 |
分析: 主峰包含杂质峰，分离度降低。
3）保持原流动相比例，改变柱温为25度，效果图：
分析：此条件下分离度>1.5，杂质距离主峰较远。
4）使用同款色谱柱重现，效果图：
分析：柱间分离情况及保留时间有差异。
2
方案二
1）使用浓度99.5%的冰醋酸，条件为：甲醇：冰醋酸：水=78：0.3：22，柱温40，流速1mL/min，筛选最优柱子月旭Topsil® C18（4.6*250mm, 5μm），效果图：
序号 | 保留 时间 | 峰面积 | 相对 峰面积 | 塔板数 | 分离度 | 不对 称度 |
1 | 8.26 | 0.06 | 1.05 | 16441 | 1.81 | 0.90 |
2 | 8.79 | 4.85 | 75.45 | 10950 | 1.26 | 0.93 |
3 | 9.17 | 0.17 | 2.70 | 18898 | 3.50 | 1.27 |
4 | 10.39 | 1.33 | 20.80 | 9349 | n.a. | 0.83 |
总和 | 6.43 | 100.00 | 55639.00 | 6.57 |
分析：此条件下分离度仍不够。
2）改变流动相比例为甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28，柱温40，流速1mL/min，Topsil® C18（4.6*250mm，5μm），效果图：
序号 | 保留 时间 | 峰面积 | 相对 峰面积 | 塔板数 | 分离度 | 不对 称度 |
1 | 12.08 | 0.28 | 4.37 | 14875 | 1.36 | 0.90 |
2 | 12.67 | 5.15 | 78.42 | 10959 | 2.31 | 1.10 |
3 | 13.78 | 0.12 | 1.91 | 13579 | 3.75 | 1.06 |
4 | 15.72 | 1.00 | 15.29 | 12282 | n.a. | 1.04 |
总和 | 6.576 | 100.00 | 51695.00 | 7.42 |
3）改变柱温为30，流动相比例为甲醇：冰醋酸：水=72：0.3：28，流速1mL/min，Topsil® C18（4.6*250mm，5μm），效果图：
序号 | 保留 时间 | 峰面积 | 相对 峰面积 | 塔板数 | 分离度 | 不对 称度 |
1 | 13.81 | 0.43 | 6.30 | 11392 | 1.90 | 1.02 |
2 | 14.84 | 5.30 | 76.77 | 10658 | 1.99 | 1.15 |
3 | 15.94 | 0.11 | 1.67 | 14283 | 4.44 | 1.14 |
4 | 18.76 | 1.05 | 15.26 | 10337 | n.a. | 1.09 |
总和 | 6.90 | 100.00 | 46670.00 | 8.32 |
序号 | 保留 时间 | 峰面积 | 相对 峰面积 | 塔板数 | 分离度 | 不对 称度 |
1 | 14.85 | 3.85 | 100.00 | 10419 | n.a. | 1.12 |
总和 | 3.85 | 100.00 | 10419.00 | n.a. |
分析：分离度>1.5，达到要求。
4）多针重现，效果图：
分析：保留时间较小差异，分离度良好。
结论：使用36.5%醋酸的流动相体系时，在合格的色谱柱条件下，选择4支重现，保留时间差异大。可从以下角度分析：
1）该物质本身就是一个两性离子，有弱酸和弱碱离子，在此条件下，流动相本身的缓冲作用很有限。
2）流动相的pH在4-5之间，这时候在反相C18中硅羟基的解离状态是最活跃的时候（硅羟基的pKa在4.2至4.5之间），物质对填料状态以及柱子之间的差异很敏感，体现在用不同支的色谱柱差异大。在检测甘草及其制品中的该物质时，均出现过这样的现象。
3）醋酸属挥发性酸，在使用36.5%乙酸和99.5%冰乙酸时，等量的变化在两种流动相体系中的影响程度不同，引起色谱结果差异性不同。
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