中国食品药品检定研究院（简称中检院）是国家检验药品生物制品质量的法定机构和最高技术仲裁机构。基于BLI（生物层干涉）技术的Octet® Red 96e分子互作分析仪是其检测分子间亲和力的主要手段之一。
Octet®分子互作分析系统
陈老湿将通过以下4篇代表性文章介绍中检院关于生物层干涉技术的应用。
1
生物学活性的主要方法
此文中[1]对一种单克隆抗体类似药BVZ-BC与对照药物贝伐单抗（一种针对VEGF的单抗药物）的相似性进行了评估，并建立了对抗体药物的表征方法和类似性评估标准。
这篇文献中涉及到的质量属性研究的部分方法
我们可以看到在生物学功能的部分，Fc受体亲和力以及C1q亲和力用到了基于BLI技术的Octet®。
检测11批次的对照药物贝伐单抗的亲和力，以均值正负三倍的区间作为99%置信区间（比如FcRn的亲和力范围在5.1-6.1×10-8nM）。类似药测试6个批次的亲和力，均在置信区间内，说明类似药与对照药无明显区别。类似性比较必须建立在稳定的方法基础上，对于对照药FcRn受体检测，使用Octet®检测所得的标准差仅为1.67×10-9nM，变异系数CV仅为3.3%，说明了Octet®具有良好的数据重复性。
对照药和类似药的其他Fc受体/C1q亲和力比较，发现两者没有明显差别
2
FcRn亲和力检测方法开发
在此文章中[2]，中检院建立了基于BLI方法检测IgG抗体与FcRn亲和力的检测方法。
链霉亲和素传感器（SA）固化生物素化的FcRn，然后与31.25 nM-4000 nM的IgG相互作用，在pH6.0 PBS环境中测试。
Trastuzumab与Bevacizumab半衰期分别为5.8d和20d，这个与Octet®检测的亲和力结果一致，说明通过Octet®检测的FcRn亲和力可以很好地预测半衰期。另外，此研究还发现了抗CD30单抗在经Cys偶联MMAE前后与FcRn的亲和力无显著性差异；Trastuzumab单抗在经Lys偶联DM1前后与FcRn的亲和力无显著性差异；将表达细胞系由SP20更换为CHO后，Cetuximab SBP-1和Cetuximab SBP-2与FcRn的亲和力无显著性差异。
3
诊断试剂原料亲和力[3]
重组人干扰素α2b（RhIFNα2b）被广泛用作抗病毒治疗剂来治疗乙肝和丙肝。目前鉴定rhIFNα2b的实验方法都比较复杂。在这项研究中，发现了一种抗rhIFNα2b纳米抗体，并将其用于鉴定rhIFNα2b的快速侧流条的开发。用RhIFNα2b免疫羊驼，建立了噬菌体纳米抗体库。通过筛选发现特异性结合rhIFNα2b的纳米抗体I22，对其纯化后确定了纳米抗体的理化性质。将纳米抗体 I22 与胶体金结合，并以侧流免疫层析法开发了rhIFNα2b的半定量快速鉴定分析方法，检测限可以达到 1 μg/mL。这种方法可以简单、快速检测假冒重组蛋白产品。其中Octet®被用来检测I22的亲和力。
Octet® RED96检测抗原和抗体的KD为2.06 nM，亲和力较强
4
MERS-CoV治疗性抗体研发
中东呼吸综合征冠状病毒 (MERS-CoV) 是一种强毒力病原体，导致中东呼吸综合征 (MERS)。MERS-CoV 抗体在预防和治疗 MERS-CoV 感染方面发挥不可或缺的作用。最近的研究表明，与抗体的中和活性相比，抗体依赖性细胞毒性（ADCC）活性与抗体病毒清除的能力更为匹配。本文研究中[4]发现无岩藻糖基化抗 MERS 抗体的 ADCC 活性高于其岩藻糖基化抗体。Octet®被用来检测FcγRIIIa与抗体的亲和力。
将生物素化FcγRIIIa固化在SA传感器上，与不同浓度的抗体结合。无岩藻糖基化抗体AF-h2E6比野生型的h2E6的亲和力高，具有更强的ADCC活性。
总结
BLI技术由于其良好的性能，是法规机构认定的检测抗体亲和力的方法之一（点击查看详情）。除了抗体表征，BLI技术因为高通量和简便的操作，可以从生物制品前期研发的靶点发现、杂交瘤/噬菌体筛选、表位分组到后期的细胞株开发等应用中大显身手，已经成为生物制药行业的必备仪器。
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-参考文献-
Analytical Similarity of a Proposed Biosimilar BVZ-BC to Bevacizumab. Anal. Chem. 2020, 92, 4, 3161–3170
应用生物膜干涉技术测定治疗性单抗与新生儿Fc受体的亲和力。中国新药杂志2016年第25卷16期
Development of novel-nanobody-based lateral-flow immunochromatographic strip test for rapid detection of recombinant human interferon α2b. Journal of Pharmaceutical Analysis,2021
Development of an antibodydependent cellular cytotoxicity reporter assay for measuring antiMiddle East Respiratory Syndrome antibody bioactivity. Scientific Reports | (2020) 10:16615
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