新品剧透 | 告别繁琐，45分钟制备原代肝实质细胞

美天旎生物技术

2022.7.25

作者美天旎

TA的动态

原代肝实质细胞是研究体外药物毒性、代谢和药代动力学的标准细胞培养模型。早在20世纪50年代科学家就开始探索用胶原酶灌流肝脏进而分离肝脏细胞^[1,2,3,4]。如今，肝脏灌流是制备原代肝实质细胞的标准方法，但仍面临诸多挑战^[5,6,7]。接受灌流的动物需要在被麻醉的同时保持心跳，只能在许可动物实验的实验室进行。灌流需要用插管插入麻醉动物的腔静脉，让蠕动泵不断驱动灌流介质（洗涤缓冲液和消化酶混合液）通过肝脏。这种技术本身非常有难度，静脉塌陷会导致灌流终止，整只动物都无法再用于实验。而且肝实质细胞极其敏感，蠕动泵设置不当带来的机械压力和灌流介质配比的些许偏差都会导致分离细胞的产量和活力明显下降。熟练掌握灌流操作需要反复的训练和经验的积累，通常一个实验室只有一到两名灌流专家，然而即使是这些专家也有10-20%的失败率，并且很难分离到活力高于70%的肝实质细胞。因此一些实验室放弃了自行灌流，转而购买商品化的冷冻肝实质细胞，然而这些细胞不仅价格昂贵，冷冻和复苏的过程也对细胞活力带来不确定性，有时复苏后的活力甚至会低于50%。

19世纪50年代的大鼠肝脏灌流-通气装置示意图^[1]

传统方法灌流小鼠肝脏^[6]

美天旎gentleMACS^TM组织解离器自2008年发布以来，广受研究人员认可，累计引用文献4000余篇（PubMed数据），已成为自动化组织解离的标杆技术。此前，使用美天旎肝脏解离试剂盒可以解离小鼠肝脏得到库普弗细胞和肝窦内皮细胞，但并不能分离肝实质细胞。现在，美天旎推出创新的gentleMACS^TM肝脏灌流技术，使用全新设计的gentleMACS灌流组件和优化配比的肝脏灌流试剂盒对啮齿动物肝脏组织进行离体灌流，进而高效制备高活力的原代肝实质细胞和肝非实质细胞。让您告别繁琐，45分钟完成解剖肝脏到收获活力满满的肝实质细胞！

gentleMACS肝脏灌流技术，是包含仪器、配件、耗材、试剂盒、软件和优化实验流程的整体解决方案

gentleMACS^TM肝脏灌流技术具有如下优势：

温和高效，高得率，高活力

gentleMACS技术灌流一个小鼠左侧肝叶（约400mg）的典型产量为约10⁷个肝实质细胞（活力大于85%，可用于铺板培养）以及约5x10⁶个肝非实质细胞。

优化的整体解决方案，结果可靠易重复

自动化仪器和标准化试剂的组合，减少不同人员操作带来的结果差异，并可平行处理多达8个样本。

操作简便快捷，新手轻松上手

简化的操作流程，无需麻醉动物，不依赖于专家经验，从解剖肝脏到获得肝实质细胞仅需45分钟，其中手工操作时间仅10分钟。

离体处理解剖肝叶，灵活利用动物样本

其他器官和肝叶可用于其他实验，实验失败也不会损失整个动物；并能灵活处理您自己的动物品系或基因型，也可在灌流前进行体内实验。

美天旎肝实质细胞制备工作流程

观看视频，了解gentleMACS灌流技术如何轻松分离高活力肝脏细胞。

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肝组织解离的方法、困难与误区大盘点！

参考资料：

[1] Miller LL, Bly CG, Watson ML, Bale WF (1951) The dominant role of the liver in plasma protein synthesis; a direct study of the isolated perfused rat liver with the aid of lysine-epsilon-C14. Journal of Experimental Medicine 94(5): 431-453.

[2] Berry MN & Friend DS (1969) High-yield preparation of isolated rat liver parenchymal cells: a biochemical and fine structural study. Journal of Cell Biology 43(3): 506-520.

[3] Seglen PO (1976) Preparation of isolated rat liver cells. Methods in Cell Biology 13:29-83.

[4] Edström S, Ekman L, Ternell M, Lundholm K (1983) Isolation of mouse liver cells: perfusion technique and metabolic evaluation. European Surgical Research 15(2): 97-102.

[5] Meyer J, Gonelle-Gispert C, Morel P, Bühler L (2016) Methods for Isolation and Purification of Murine Liver Sinusoidal Endothelial Cells: A Systematic Review. PLoS One 11(3): e0151945.

[6] Cabral F, Miller CM, Kudrna KM, Hass BE, Daubendiek JG, et al (2018) Purification of Hepatocytes and Sinusoidal Endothelial Cells from Mouse Liver Perfusion. Journal of Visualized Experiments 132: e56993.

[7] Liu J, Huang X, Werner M, Broering R, Yang D, et al (2017) Advanced Method for Isolation of Mouse Hepatocytes, Liver Sinusoidal Endothelial Cells, and Kupffer Cells. Methods in Molecular Biology 1540: 249-258.