高效液相色谱分析，如何避免碱性化合物的拖尾问题？

恒谱生 uHPLCs

2022.12.24

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提起生物碱，制药的小伙伴肯定不陌生，它是中草药中最重要也最具有价值的生物活性成分之一。生物碱可分为59种，它们的结构比较复杂，用传统的方法分离效果不佳。高效液相色谱法还没出现之前，对于生物碱的分离纯化一直是学者们的难题。但是，即使使用液相色谱法分离，也会存在许多问题。碱性化合物分析中最显著的难题是峰形拖尾，而且碱性越强的时候，就越容易发生拖尾现象。恒谱生和你一起探讨一下峰拖尾该如何避免！

流动相

调节流动相也可以改善峰拖尾的现象，前期在选择流动相的时候，要考虑流动相pH值的范围。对碱性化合物来说，流动相的pH值对峰形会有较大影响，并且对保留因子和选择性也有很大影响。恒谱生建议如果要分离碱性化合物，最好选择pH值≤2.5，这样会有比较好的峰形。恒谱生液相色谱柱的ph稳定值在1.5-11不等，适合各种需求、各种分离模式的液相分析。

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固定相

C18色谱柱是反相色谱分析中经常使用到的色谱柱。但是十八烷基碳链很长，键合的时候空间位阻非常大，导致键合率不高，这样，便会残留大量未被键合的硅羟基。硅羟基在一些反相流动相中，容易解离。由于游离的硅羟基与解离后碱性化合产生的二级作用，导致了碱性化合物峰行出现拖尾现象。因此分析碱性化合物时，选择硅羟基活性小的键合相是获得良好峰形的关键。对于固定相的选择最好采用99.99%纯度以上的超纯硅胶，金属残留量较低低，使得键合率增加，游离的硅羟基减少。

恒谱生液相色谱柱都采用高纯度的硅胶基质填料，其中USHB C18-BIO专为各种碱性化合物的分离而设计，pH值的耐受范围为1.5-10，金属杂质极低，采取二次封尾的技术。这样做主要是为了进一步降低硅羟基的活性使得分析时可以获得良好峰形。

今天恒谱生分享的知识先到这啦，希望对您的工作有所帮助！