（图片来源：包图网）
在反相色谱中，流动相的选择原则是：
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非极性/中性化合物分析一般用有机溶剂和水。极性（特别是离子型）化合物分析时，通常需要在水中加入酸/碱或者缓冲盐来调整流动相pH值以获得对称的峰形和合理的保留时间。
向流动相中加入改性剂主要有以下两种方式：
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01 氢离子抑制法
● 对于弱酸（3≤pka≤7）/弱碱（7≤pka≤8）组分，一般通过调节流动相的pH来抑制目标化合物的解离，以达到分离目的。弱酸的反相色谱保留值随流动相pH值的减小而增大，当pH值远小于弱酸的pka值（pH＜pka-2）时，弱酸99%以上以分子形式存在，有利于在反相色谱柱上保留。
● 对于弱碱，情况相反（须pH＞pka+2）。因此分析弱酸样品时，通常在流动相中加入少量酸性缓冲液，如三氟乙酸等（实例见图1）；分析弱碱样品时，则加入少量碱性缓冲液，如三乙胺等。
● 下表列出几种常见缓冲盐的pH值可用范围。一般缓冲盐浓度在5-50mmol/L范围就够用，浓度高的缓冲盐（＞50mmol/L）虽然缓冲能力增强，但可能在与高比例有机相混合时析出，对液相色谱输液泵等产生不利影响。
（图片来源：包图网）
液相色谱中常用缓冲液
缓冲液组成 | 缓冲液 pka值 | 缓冲范围 pH值 | UV截至波长 |
三氟乙酸 | ＞2 | 1.5-2.5 | 210nm （0.1%） |
磷酸/磷酸二氢钾 或磷酸氢二钾 | 2.1 | ＜3.1 | ＜200nm （0.1%） |
7.2 12.3 | 6.2-8.2 11.3-13.3 | ＜200nm （10mmol/L） | |
柠檬酸/ 柠檬酸三钾 | 3.1 4.7 5.4 | 2.1-6.4 | 230nm （10mmol/L） |
甲酸/甲酸钾 | 3.8 | 2.8-4.8 | 210nm （10mmol/L） |
乙酸/乙酸钾 | 4.8 | 3.8-5.8 | 210nm （10mmol/L） |
碳酸氢钾/ 碳酸钾 | 6.4 10.3 | 5.4-7.4 9.3-11.3 | ＜200nm （10mmol/L） |
氯化铵/氨 | 9.2 | 9.2-10.2 | 200nm （10mmol/L） |
1-甲基哌啶盐酸盐/1-甲基哌啶 | 10.1 | 9.1-11.1 | 215nm （10mmol/L） |
三乙胺盐酸盐/ 三乙胺 | 11.0 | 10.0-12.0 | ＜200nm （10mmol/L） |
图1 多种有机酸分离色谱图
（流动相中含磷酸盐）
1-草酸；2-酒石酸；3-奎宁酸；4-甲酸；
5-丙酮酸；6-苹果酸；7-抗坏血酸；8-乳酸；
9-乙酸；10-马来酸；11-柠檬酸；12-富马酸；
13-顺乌头酸；14-丙烯酸；15-丙酸；16-柠康酸
02 离子对色谱法
● 对于强酸/碱及其他离子型化合物，需要在水中加入相应的“对/反离子”，使其与待测组分离子结合生成弱极性的离子对化合物（中性缔合物），以增加其在反相色谱柱（如C18、C8）上的保留，从而改善分离效果。
● 离子对试剂一般可分为酸性和碱性两大类：
1）分析碱性物质常用的离子对试剂为烷基磺酸盐（实例见图2），如己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、十二烷基磺酸钠等。
2）分离多羧基、磺酸基等酸性物质常用四丁基季铵盐，如四丁基溴化铵、四丁基氯化铵等。被测组分保留时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值等都有关。
图2 水溶性维生素分离色谱图
（流动相中含己烷磺酸钠）
1-维生素C；2-维生素B3；3-维生素B6；
4-叶酸；5-维生素B2；6-维生素B1
作者：裴海洋
排版：赵林
审核：夏微微
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