线粒体可产生大约 90% 的细胞活性氧 (ROS)。由于 ROS 过量产生和抗氧化剂活性降低,导致线粒体活性氧 (mtROS) 产生和去除之间的不平衡,进入氧化应激状态,从而导致氧化损伤,影响多种细胞成分,如脂质、DNA 和蛋白质。
线粒体活性氧在多种生理过程中发挥作用,包括增殖、分化、自噬、免疫细胞激活和机体衰老¹:
缺氧:在缺氧条件下,细胞会调用转录和非转录反应来增加氧气供应,同时减少耗氧量;mtROS 可促进这些反应。
细胞分化:mtROS 是多种细胞分化的活性信号分子,例如干细胞分化、肌原性分化和肌肉再生。
自噬:在自噬过程中,需要mtROS在细胞饥饿条件下诱导自噬,以促进细胞存活或在不可能存活时促进受控的自噬性细胞死亡。
免疫:mtROS 通过激活适应性免疫和先天免疫反应途径,在对抗感染方面发挥着关键作用。
衰老:线粒体功能障碍和随之而来的过量 ROS 产生会导致细胞衰老和死亡。然而,在果蝇和幼鼠中开展的几项研究表明,受控的 mtROS 产生可能会激活对生物体有益的适应性反应并延长寿命。
超氧化物阴离子是线粒体中含量最高的ROS,Invitrogen明星产品MitoSOX是线粒体超氧化物检测中使用最广泛的试剂,近5年有近13000篇文献引用。
Invitrogen MitoSOX线粒体超氧化物指示剂是创新型荧光染料,用于检测活细胞线粒体中的超氧化物,具有高选择性和特异性(见图 1 和图 2)。
图1. MitoSOX Green 和 MitoSOX Red 线粒体超氧化物指示剂的选择性。
MitoSOX是活细胞渗透性染料,可快速、选择性地靶向线粒体(图2)。
图2. MitoSOX具有优异的线粒体靶向性。
进入线粒体后,MitoSOX会被线粒体中的超氧化物氧化,发出亮绿色或红色荧光,可以通过荧光显微镜进行检测(见图3和图4)。MitoSOX很容易被超氧化物氧化,但不会被其他活性氧 (ROS) 或活性氮 (RNS)氧化,表现出高度特异性;超氧化物歧化酶和超氧化物清除剂可抑制MitoSOX的氧化。
图3. MitoSOX Green 和 MitoSOX Red 线粒体超氧化物指示剂激发和发射光谱。
图 4. MitoSOX Green (A) 和 MitoSOX Red (B) 线粒体超氧化物指示剂染色结果。
为了更贴合中低通量实验需求和提高多参数实验灵活性,MitoSOX家族也在不断壮大,现在除了经典的10支装MitoSOX Red,还有上文数据中展示的新颜色——MitoSOX Green,以及多种包装大小:单支、两支、五支装。
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参考文献:
1. frontiersin.org/articles/10.3389/fphys.2021.627837/full。
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