外泌体提取:
外泌体的提取方法有多种:包括传统的差速离心、密度梯度离心,以及后来发展的超滤法、聚合物沉淀法、免疫分离、隔离筛选法、体积排阻色谱法等。这些方法各有利弊。
服务内容莱德盟生物综合各个方法的利弊,在现有试剂盒基础上进行优化,优化的外泌体分离试剂盒可以安全、快速获得高纯度和高产量的外泌体。
外泌体分离技术 | 耗时短 | 操作简便 | 外泌体产量 | 外泌体纯度 | 外泌体完整性 |
差速离心法 | | √ | √ | | |
密度梯度离心法 | | | | √ | √ |
超滤法 | √ | √ | √ | | √ |
聚合物沉淀法 | √ | √ | √ | | √ |
试剂盒 | √ | √ | √ | √ | √ |
样本量血清:样本量>5ml(全血10ml)。血浆:样本量>5ml(全血10ml)。体液:样本量>20ml。细胞培养上清液:样本量>20ml。
样本保存及运送含外泌体的样本应低温保存;短时间(一般1周以内)可放4℃,长时间可放-20℃或者-80℃,并避免反复冻融。
外泌体鉴定据国际细胞外囊泡学会(ISEV)在2014年的提议,外泌体鉴定分为三个层面:透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、Nanosight粒径、蛋白标志物。
服务内容莱德盟生物技术团队拥有丰富的外泌体鉴定经验,可提供外泌体透射电镜鉴定结果、精准的外泌体粒径分析、外泌体表面标志物表达鉴定。
--------------------------------------------
TEM鉴定外泌体大小、形态透射电镜分辨率为0.1~0.2nm,适合外泌体双层囊膜超微结构观察,可观测样本中是否存在外泌体样结构(通常为茶托型或一侧凹陷的半球形),同时可测量外泌体大小。
--------------------------------------------
外泌体标志物测定外泌体表面存在特异性标志物分子,如CD9、CD81、CD63等。以琳生物可以提供Western blot和流式细胞术的鉴定结果。
----------------------------
广州莱德盟生物医学实验外包服务:
常规类:AAV病毒包装、慢病毒包装、WB、qPCR、甲基化PCR、细胞功能、ELISA、免疫组化、原位杂交、载体构建、流式细胞术(多色流式)特色类:RNA(circRNA、lncRNA、microRNA)全套功能研究方案、双萤光报告系统服务、CRISPR/cas9服务、动物实验、IP实验(ChIP、Co-IP、RIP、DNA/RNA/GST-pull dwon)、外泌体检测、课题整体实验。其它:标书制作、论文润色、SCI论文、博士论文、硕士论文。