将细胞制成105/ml的悬液,加入6孔细胞培养板,添加物抗生素培养基后,于5%二氧化碳孵箱36℃±1℃培养过夜。将供试品加入指示细胞板中,置5%二氧化碳孵箱36℃±1℃培养3-5天。指示细胞培养物至少传代一次。末代传代的细胞用二苯甲酰胺荧光染料进行染色后,在显微镜下进行观察。同时用无抗生素培养基和已知阳性的标准菌种进行同法操作,分别作为阴性和阳性对照。...
试剂 (1)二苯甲酰胺荧光染料浓缩液 称取二苯甲酰胺荧光染料5mg ,加人100ml 不含酚红和碳酸氢钠的Hank 's 平衡盐溶液中,室温下用磁力搅拌器搅拌30~40 分钟,使完全溶解,-20℃ 避光保存。 (2)二苯甲酰胺荧光染料工作液 无酚红和碳酸氢钠的Hank ' s 溶液100ml 中加人二苯甲酰胺荧光染料浓缩液lml ,混匀。 ...
其中,染料法(SYBR Green法)是在PCR反应体系中加入SYBR Green的染料,染料在游离的状态下不发荧光,随着反应的扩增,染料与双链DNA结合,激发荧光,通过对荧光信号的检测即可得出样品中目标DNA的含量。但是,由于SYBR会无差别的与所有双链DNA结合发出荧光,因此其特异性相对较差。需要在PCR扩增结束之后,通过溶解曲线对全部PCR产物的TM值进行分析来判断产物是否唯一。...
DNA检测所用的指示细胞通常是细胞质区域较大的Vero细胞,如果原样本中含有支原体,那么当细胞DNA被荧光染料(如Hoechst染料)染色时,就可以在指示细胞的核周围观察到荧光斑点或荧光颗粒。分离培养法用来检测支原体M. hyorhinis菌株并不可靠,而DNA法可以准确的将其检测出来。 PCR法 PCR 法也可以检测M....
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