图2,Comet Assay规格及Cytation对应适配器图3,Cytaiton自动化成像系统对2-well,3-well和96well规格的CometAssay样品成像结果。可以看出,上排DNA无断裂损伤的样品,每个细胞呈现圆形,而有DNA损伤的样品则有明显的彗星状拖尾。 得到了清晰的图像之后,如果需要测定DNA损伤的情况,就必须要进行精确的图像分析。...
中性彗星实验主要用于检测DNA双链的断裂损伤,碱性彗星实验具有更高的灵敏性,可用于检测更少量的单链和双链断裂损伤。需要注意的是,试验过程中的个方面,包括样品准备、电泳条件、视觉分析参数(如染色强度、显微镜光强度以及使用显微镜滤镜和相机动态和环境条件(如背景照明)已经被研究,可能影响DNA迁移。 ...
如果在碱性电泳液(pH>13)中,先是DNA双链解螺旋且碱变性为单链,单链断裂的碎片分子量小可进入凝胶中,电泳时断链或碎片离开核DNA向阳性迁移,形成拖尾。细胞DNA受损愈重,产生的断链或碱易变性断片就愈多,其断链或断片也就愈小,在电场作用下迁移的DNA量多,迁移的距离长,表现为尾长增加和尾部荧光强度增强,因此,通过测定DNA迁移部分的光密度或迁移长度可定量地测定单个细胞DNA损伤的程度。...
(2)测定DNA损伤程度和细胞杀灭效应之间的关系 最近,用“彗星”法分析人体肿瘤多细胞球体和实验动物肿瘤的结果显示,初始DNA损伤的量化测定可能成为评价细胞杀灭效应的指标。结果亦显示肿瘤细胞具有修复DNA损伤的能力,而细胞修复损伤的能力被认为是判断同样打击条件下,不同细胞存活程度的另一重要依据。...
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