一、实验原理:
vc在紫外区246.0哪处有最大吸收,且线性良好,可以直接采用紫外分光光度法进行测量。然而由于果汁中其他成分在紫外区有本底吸收,干扰较大,如何校正本底吸收成为应用紫外光谱法测定vc的关键。
二、仪器与药品:
紫外分光光度计、电子天平、恒温水浴、抗坏血酸、果酒、CuCl2、HAc,所用试剂均为分析纯,试验用水均为二次蒸馏水。
三、溶液配制:
1、100 ug/ml Vc标准溶液的配制:称取0.0504 g抗坏血酸,以lO ml混酸溶解,并以蒸馏水定容到500 ml容量瓶中。
2、混酸的配制:3 ml 的 3% H3PO4与 7 ml的8%HAc混合稀释定容至50ml容量瓶中。
3、氯化铜溶液(1mg/ml)的配制:准确称取无水CuCl2 0.002 l g,以二次蒸馏水溶解并定容到100 ml的容量瓶中,稀释到10ug/ml备用。
4、样品配制(果酒稀释100倍):取1ml果酒,到100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释定容。
四、标准曲线的绘制
准确移取100ug/ml Vc标准溶液1.00、2.00、5.00、10.00、25.00 ml于5个50 ml的容量瓶中;加入3.00 ml浓度5×10-3 mol/L氯化铜溶液,少量二次蒸馏水稀释,插匀;于70℃恒温水浴中反应5 min,二次蒸馏水稀释到刻度,放置20 min;以试剂空白为参比,于246.0nm波长处分别测定吸光度;以Vc浓度为横坐标,吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
五、样品吸光度的测定(果酒稀释100倍)
样品 | 1 | 2 | 3 |
吸光度(A值) |
六、数据整理
三次测量的平均值
每毫升含Vc: