利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。在提取过程中,染色体会发生机械断裂,产生大小不同的片段,因此分离基因组DNA时应尽量在温和的条件下操作,如尽量减少酚/氯仿抽提、混匀过程要轻缓, 以保证得到较长的DNA。
实验方法原理 | 加入一定量的异丙醇或乙醇,基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出,而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀附于壁上及底部, 从而达到提取的目的。 |
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实验材料 | |
试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 1. 收取10~50 g 新鲜的植物组织。
2. 植物组织用冷的无菌水洗涤、吸干,放人液氮中冻结,用研钵和研杵研成细粉。
5. 用JA-14转子4℃,5 500 g 离心10min 保留上清,必要时重复此歩骤以除去残渣。
8. 加入0.5 ml 10 mg/ml 的溴化乙锭,冰上放置30 min,4℃ 7500 g 离心10min.
12. 加入2体积水和6体积100%乙醇,混匀,-20℃放置1 h,用JA-20或JA-21转子4℃,7500 g 离心10 min。
13. 沉淀用TE缓冲液重悬,加入1/10体积的3 mol/l 乙酸钠和2体积的100%乙酵重悬,重复离心。 |