植物组织制备基因组DNA实验——CTAB法

植物组织

CTAB液2-疏基乙醇TE高盐TE氯仿异戊醇

研钵离心机培养箱

1.  在所需量的CTAB抽提液中加入2-巯基乙醇，使终浓度达2%。将此溶液及CTAB溶液加热至65℃。

2.  用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷却粉碎器/匀浆器，将植物组织粉碎成为细粉。

3.  将冷冻的组织转移到一个抗有机溶剂的试管或烧杯中。

4.  往粉碎的组织中加人预热的2-ME/CTAB，混合使之充分湿润，于65℃温育10~60 min，混匀。

5.  用等体积的24：1氯仿/辛醇或氯仿/异戊醇抽提匀浆液，颠倒使充分混合。

6.  于4℃7 500 g 离心5 min，回收上（水）相。

7.  在回收的上层相中加入1/10体积的的65℃的CTAB溶液，颠倒混匀。

8.  用等体积的氯仿/辛醇抽提，混匀，离心，回收上（水）相。

9.  加入正好1体积的CTAB沉淀液，颠倒混匀，如果沉淀可见，继续做步骤10，否则于65℃温育30min。

10.  于4℃，500 g 离心5 min。
 

11.  移出上清，但不要丢弃，用高盐的TE缓沖液重悬沉淀。

12.  如果沉淀难于重悬，于65℃温育30 min，重复直至所有的或大部分沉淀溶解。

13.  加入0.6体积的异丙醇沉淀核酸，充分混匀，于4℃，7 500 g 离心15min。

14.  用80%乙醇洗涤沉淀物，干燥，用尽可能少的缓冲液重悬。