方案1 两相柱测序仪的样品上样实验
实验材料 | |
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试剂、试剂盒 | |
仪器、耗材 | |
实验步骤 | 一、浸润层析柱1.将准备好的两相柱的亲水段(凸向接头)移开,放在一边。 2.将柱的疏水段(凹向接头)和上样漏斗装配在一起。 3.向下按压上样漏斗并且顺时针旋转,将上样漏斗和柱的疏水段装人样品上样室中。 4.将 1ml HPLC 级的甲醇充满上样漏斗。 5.旋紧上样器的螺旋盖。 6.打开氮气(80psi) 维持足够时间,使上样漏斗变空,但应确保柱床处于浸润状态。 7.旋开螺旋盖,重复步骤④~⑥,但要用 1ml 的 2%TFA 水溶液代替甲醇。如果容许填充柱干燥,可重复此步骤。 二、准备样品溶液及上样8.用 2%TFA 水溶液稀释样品溶液至 1~5 ml,稀释比至少为 1:1。如果样品溶液在稀释前为 1ml,则要保留上样时的流出液。 9.在柱子下面放一个干净的小烧杯或 50 ml 的聚丙烯管,收集过柱的流出液。 10.从样品点样器上去掉螺旋盖。 11.用样品溶液充满上样漏斗,使 1ml 的样品溶液在 2 min 内过柱。 一次能上多于 5 ml 的样品溶液,但需要比较长的上样时间。 12.旋紧螺旋盖,调整氮气压力为 80psi。
13.如果上样量较大,可重复步骤⑩??。 14.全部上样完成后,以 80psi 氮气干燥柱子 30s。 15.去掉螺旋盖,逆时针旋转并松开上样漏斗。 16.取出上样漏斗和与其相连的疏水柱,将二者分开。 展开 |