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氨基酸的检测方法

2022.6.08
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zhaoqisun

致力于为分析测试行业奉献终身


1、茚三酮反应(ninhydrin reaction)

试剂:茚三酮(弱酸环境加热)

颜色:紫色(脯氨酸、羟脯氨酸为黄色)

原理:检验α-氨基酸

2、坂口反应 (Sakaguchi reaction)

试剂:α-萘酚+碱性次溴酸钠

颜色:红色

原理:检验胍基,精氨酸有此反应

3、米隆反应(又称米伦氏反应)

试剂: HgNO3+HNO3+(加热)

颜色:红色

原理:检验酚基,酪氨酸有此反应,未加热则为白色

4、Folin-Ciocalteau反应(酚试剂反应)

试剂:磷钨酸-磷钼酸

颜色:蓝色

原理:检验酚基,酪氨酸有此反应

5、黄蛋白反应

试剂:浓硝酸(煮沸)

颜色:黄色

原理:检验苯环, 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应

6、Hopkin-Cole反应(乙醛酸反应)

试剂:乙醛酸,浓硫酸

颜色:紫红色

原理:检验吲哚基,色氨酸有此反应

7、Ehrlich反应

试剂:对二甲氨基苯甲醛、浓盐酸

颜色:蓝色

原理:检验吲哚基,色氨酸有此反应

8、硝普盐试验

试剂:Na2(NO)Fe(CN)2·2H2O、稀氨水

颜色:红色

原理:检验巯基,半胱氨酸有此反应

9、Sulliwan反应

试剂:1,2-萘醌-4-磺酸钠、Na2SO3

颜色:红色

原理:检验巯基,半胱氨酸有此反应

10、Folin反应

试剂:1,2-萘醌-4-磺酸钠(碱性环境)

颜色:深红色

原理:检验α-氨基酸

肽键(peptide bond):一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合,除去一分子水形成的酰胺键。

肽(peptide):两个或两个以上氨基酸通过肽键共价连接形成的聚合物。是氨基酸通过肽键相连的化合物,蛋白质不完全水解的产物也是肽。肽按其组成的氨基酸数目为2个、3个和4个等不同而分别称为二肽、三肽和四肽等,一般含10个以下氨基酸组成的称寡肽(oligopeptide),由10个以上氨基酸组成的称多肽(polypeptide),它们都简称为肽。肽链中的氨基酸已不是游离的氨基酸分子,因为其氨基和羧基在生成肽键中都被结合掉了,因此多肽和蛋白质分子中的氨基酸均称为氨基酸残基(amino acid residue)。

多肽有开链肽和环状肽。在人体内主要是开链肽。开链肽具有一个游离的氨基末端和一个游离的羧基末端,分别保留有游离的α-氨基和α-羧基,故又称为多肽链的N端(氨基端)和C端(羧基端),书写时一般将N端写在分子的左边,并用(H)表示,并以此开始对多肽分子中的氨基酸残基依次编号,而将肽链的C端写在分子的右边,并用(OH)来表示。已有约20万种多肽和蛋白质分子中的肽段的氨基酸组成和排列顺序被测定了出来,其中不少是与医学关系密切的多肽,分别具有重要的生理功能或药理作用。 

多肽在体内具有广泛的分布与重要的生理功能。其中谷胱甘肽在红细胞中含量丰富,具有保护细胞膜结构及使细胞内酶蛋白处于还原、活性状态的功能。而在各种多肽中,谷胱甘肽的结构比较特殊,分子中谷氨酸是以其γ-羧基与半胱氨酸的α-氨基脱水缩合生成肽键的,且它在细胞中可进行可逆的氧化还原反应,因此有还原型与氧化型两种谷胱甘肽。

一些具有强大生物活性的多肽分子不断地被发现与鉴定,它们大多具有重要的生理功能或药理作用,又如一些“脑肽”与机体的学习记忆、睡眠、食欲和行为都有密切关系,这增加了人们对多肽重要性的认识,多肽也已成为生物化学中引人瞩目的研究领域之一。

多肽和蛋白质的区别,一方面是多肽中氨基酸残基数较蛋白质少,一般少于50个,而蛋白质大多由100个以上氨基酸残基组成,但它们之间在数量上也没有严格的分界线,除分子量外,还认为多肽一般没有严密并相对稳定的空间结构,即其空间结构比较易变具有可塑性,而蛋白质分子则具有相对严密、比较稳定的空间结构,这也是蛋白质发挥生理功能的基础,因此一般将胰岛素划归为蛋白质。但有些书上也还不严格地称胰岛素为多肽,因其分子量较小。但多肽和蛋白质都是氨基酸的多聚缩合物,而多肽也是蛋白质不完全水解的产物。

氨基酸以及各种氨基酸组成的二肽和三肽的吸收与单糖相似,是主动转运,且都是同Na+转运耦联的。当肽进入肠粘膜上皮细胞后,立即被存在于细胞内的肽酶水解为氨基酸。因此,吸收入静脉血中的几乎全部是氨基酸。


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