疏水相互作用层析是以介质疏水基团和蛋白质疏水区域间的亲和作用为基础的。疏水力是浸在一种极性液体（如水）中的非极性物质的排斥力。胞膜蛋白都具有一个明显的疏水区域以锚定在膜上。可溶性蛋白质在外表面上可能存在疏水小区，它促进蛋白复合物的形成，也可能是疏水配基结合部位或活性部位。这些暴露的疏水区对疏水层析纯化而言足非常理想的。尽管疏水层析利用相对非持异的亲和力分离纯化蛋白质，而且不具有高分辨率，但是该法很有用。
来源：《蛋白质技术手册》
| 实验方法原理 | 在疏水层析的主要支持介质上含有大小不等的疏水侧链，烷基或芳香基，可是绝大多数情况起作用的是苯基或辛基。当碳氢链长度增加，即变得更疏水时，疏水强的少量蛋白质被吸附。这时疏水相互作用太强，需用极端方法洗脱，可能会导致蛋白质变性。苯基琼脂糖比辛基琼脂糖疏水性低，是疏水纯化中效果不错的常用介质，尤其是试用于纯化开始时。 疏水相互作用介质 苯基琼脂糖-O-CH2-CHOH-CH2-O-C6H5 辛基琼脂糖-O-CH2-CHOH-CH2-O-（CH2）7-CH3 溶液盐浓度增加时疏水作用变得更强。因此，大多数疏水层析程序都是高盐时上样，降低盐浓度时洗脱。所以在硫酸铵沉淀或离子交换层析后可以方便地直接进行疏水层析纯化。温和的洗脱条件及高蛋白质结合容置（10～100 mg/ml）使疏水层析在蛋白质纯化中成为很有价值的方法，也是更换缓冲液的方法之一。 |
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| 实验材料 | |
| 试剂、试剂盒 | |
| 仪器、耗材 | |
| 实验步骤 | 下述方案设定样品是在 75％ 硫酸铵沉淀后溶在 50％ 硫酸铵溶液的情况。 1. 装填 5 ml 苯基琼脂糖 CL-4B 进入柱内； 2. 10 倍柱床体积层析缓冲液（20 mmol/L，pH 7.0 磷酸钠盐，50％ 硫酸铵）洗柱； 3. 调整样品液符合要求，即在 pH 7.0 磷酸钠缓冲液中含 50％ 硫酸铵。上样总蛋白量 200～500 mg； 4. 3 倍柱床体积层析缓冲液洗柱或洗至 A280 值回到基线； 5. 用分步梯度法洗脱。每步依次分别采用两倍体积各含 40％、30％、20％、10％ 或 0％ 硫酸铵的 pH 7.0 磷酸钠缓冲液洗脱； 6. 再依次用 5 倍体积水、5 倍体积 1 mol/L NaCl 和 5 倍体积水洗柱，使其获得再生。 展开 |
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