分析测试百科网

搜索

喜欢作者

微信支付微信支付
×

细胞膜流动性测定实验_荧光探针标记法

2019.4.03
头像

zhaochenxu

致力于为分析测试行业奉献终身
实验方法原理常用于研究膜脂流动性的荧光探针为1,6-二苯基-1,3,5-己三烯（DPH）。DPH掺入到细胞膜脂烃链区后，介质粘度增加，顺反异构受到抑制，成为唯一能发光的全反构型。
实验材料

肿瘤细胞

试剂、试剂盒

磷酸盐缓冲液DPH

仪器、耗材

荧光分光光度计离心机

实验步骤

1.  取对数生长期的肿瘤细胞，以pH7.2，0.01 mol/l 磷酸盐缓冲液洗涤两次。

2.  取107个细胞，离心，加入2×106 mol/l DPH溶液2 ml。

3.  25℃振荡温育30 min，再以PBS洗涤1次。

4.  悬浮于4 ml PBS溶液中。

5.  测定仪器为荧光分光光度计，在激发波长362 nm，发射波长432 nm，狭缝10条件下测定荧光强度。

注意事项

由于DPH可进入细胞内部，后来又合成了其阳性离子衍生物1-（4-三甲胺苯基）-6-苯基-1,3,5-己三烯（TMDPH）。TMDPH不能透过细胞膜进入细胞，因此，理论上TMDPH标记法较DPH标记法更能准确的反映膜脂流动性。


互联网
仪器推荐
文章推荐