细胞膜完整性及膜转运功能检测实验—乙酰乙酸染色法

2019.4.05

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实验方法原理	FDA是一种无荧光的酯酶底物，能被活细胞摄取并在细胞内被酯酶水解形成荧光素。常用方法是将FDA与PI 同时孵育细胞，测定活细胞与死亡细胞比例。
实验步骤	1. 主要试剂的配制 FDA（Molecularprobes，In.OR，USA）保存液 1 mg/ml 的丙酮溶液。 PI（Sigma，MO，USA）保存液 1 mg/ml 的水溶液。 2. 操作流程 2.1 常规收集细胞（1×10⁶），悬浮于 1 ml 的Hank缓冲液（HBSS）中，加入 2 μl FDA 保存液，于 37℃ 孵育 15 min，加入 20 μl PI 保存液，室温下染色 5 min。 2.2 流式细胞仪检测采用蓝色激发光（氩离子激光波长 488 nm），绿色荧光检测范围为 530 nm；红色荧光检测范围为>600 nm。 3. 结果观察活细胞显示出强的绿色荧光，而死亡细胞显示出红色荧光。凋亡细胞早期由于膜功能尚完好，不被 PI 着色，而且由于仍具降解 FDA 能力，所以显示绿色荧光。随着细胞凋亡的进一步发展，细胞膜功能逐渐丧失而被 PI 着色，而且降解 FDA 的能力减弱，其绿色荧光逐渐减弱，甚至消失。展

实验方法原理

FDA是一种无荧光的酯酶底物，能被活细胞摄取并在细胞内被酯酶水解形成荧光素。

常用方法是将FDA与PI 同时孵育细胞，测定活细胞与死亡细胞比例。

实验步骤

1. 主要试剂的配制

FDA（Molecularprobes，In.OR，USA）保存液 1 mg/ml 的丙酮溶液。

PI（Sigma，MO，USA）保存液 1 mg/ml 的水溶液。

2. 操作流程

2.1 常规收集细胞（1×10⁶），悬浮于 1 ml 的Hank缓冲液（HBSS）中，加入 2 μl FDA 保存液，于 37℃ 孵育 15 min，加入 20 μl PI 保存液，室温下染色 5 min。

2.2 流式细胞仪检测采用蓝色激发光（氩离子激光波长 488 nm），绿色荧光检测范围为 530 nm；红色荧光检测范围为>600 nm。

3. 结果观察

活细胞显示出强的绿色荧光，而死亡细胞显示出红色荧光。凋亡细胞早期由于膜功能尚完好，不被 PI 着色，而且由于仍具降解 FDA 能力，所以显示绿色荧光。随着细胞凋亡的进一步发展，细胞膜功能逐渐丧失而被 PI 着色，而且降解 FDA 的能力减弱，其绿色荧光逐渐减弱，甚至消失。

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