质粒的转化及转化子的鉴定实验——电转化法

2019.4.07

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实验方法原理	电转化法：外加于细胞膜上的电场造成细胞膜的不稳定，形成电穿孔，不仅有利于离子和水进入细菌细胞，也有利于孔DNA等大分子进入。同时DNA在电场中形成的极性对于它运输进细胞也是非常重要的。
实验材料	外源片段与载体的连接产物大肠杆菌感受态细胞
试剂、试剂盒	X-gal Amp LA培养基水抗生素
仪器、耗材	培养皿灭菌锅离心管摇床
实验步骤	1. l ml X-gal (20 mg/ml)，25 ml Amp（100 mg/ml），250 ml 制备选择性培养基平板：在融化的250 ml LA培养基中250 mI PTG (200mg/ml)，混匀后倒入灭菌培养皿中； 2. 取出制备好的感受态细胞，放在冰上融化； 3. 连接产物，用移液器轻轻吸打均匀，置冰上；每管感受态细胞加入1 μl 4. 电转化仪选择1800 V作为输出电压； 5. 将要转化的混合物加入预冷的1 mm的电转化杯中，立即按下按纽电击； 6. 立即加1 ml SOC培养基到转化杯中重悬细胞； 7. 将细胞转入合适的培养管中37 ℃培养1小时； 8. 吸取合适体积的菌液涂布已倒好的选择培养基平板； 9. 37 ℃培养过夜，观察结果。展开

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