实验概要
本文以鼻疽为例介绍了固相补体结合试验(solid phase complementfixation test，SPCFT)的原理和操作流程。
实验原理
原理与直接补体结合反应的原理相同，即以是否溶血为标志，间接测定补体是否被特异的抗原抗体复合物所消耗的一种血清学反应。如果不溶血称为固相补体结合试验阳性；发生溶血，则称为固相补体结合试验阴性。由于该试验是在琼脂糖凝胶反应盘中进行的，因而使反应用要素和反应结果固相化，故名。
主要试剂
1. 1%琼脂糖凝胶琼脂糖1g，加入生理盐水100ml中，煮沸融化备用。
2. 1%溶血素。
3. 压积绵羊红细胞用生理盐水以3 000 r/min洗3次，每次3min。
4. 冻干补体及鼻疽抗原。
5. 被检血清及标准阳性、阴性鼻疽血清。
实验步骤
1. 溶血系统琼脂糖凝胶反应盘的制备及打孔：取1%溶血素溶液32ml与压积绵羊红细胞0.8ml混合，置37℃水浴槽中感作30min，即为致敏红细胞液。吸取致敏红细液33ml，加入融解后冷至51～55℃的1%琼脂糖凝胶100ml中，混匀，倾注入特制的塑料反应盘内，每盘约25ml。待其凝固后，用直径6mm打孔器打孔，每盘打孔两列，每列4孔，孔距不得小于8mm。
2. 溶菌系统的处理、加入及感作：将1∶2稀释的被检血清与1∶50的鼻疽抗原及1∶2倍的补体等量混合，放37℃恒温箱中感作1h后，用微量吸管吸取以上三者的等量混合物25μl，加入制备好的致敏红细胞琼脂糖凝胶反应盘的孔中，然后将加过溶菌系统的反应盘置37℃恒温箱中感作25～3h后，观察结果。注意每次试验应作标准阳性血清及阴性血清、抗原及补体的对照，每个对照孔诸要素的混合、感作及滴加量，均与试验孔相同。
注意事项
1. 一块25×75cm的致敏红细胞反应盘一般打孔两行，每行不超过4孔，孔距不低于8mm，否则由于打孔过多，孔距太近，容易产生溶血排斥现象，严重的可影响试验结果。
2. 在制备致敏红细胞反应盘时，还必须注意厚度均一，应于呈水平的台面上浇制为宜，否则反应盘两端的琼脂糖厚度不同，势必造成薄者溶血环大，厚者溶血环小。
3. 特异性及敏感性，在固相补反中，除与类鼻疽血清发生明显的交叉反应外，与被试的其它多种血清均不发生交叉反应。这种方法对鼻疽马的检出率比直接补体结合反应高，且操作简单。依本方法的原理还可用于马传贫抗体及流行性乙型脑炎病毒抗原的检测。
首页
