吗啡的镇痛作用
一、 目的：
1、学习镇痛药的筛选方法
2、观察吗啡的镇痛作用
二、 原理：
疼痛概念：由于伤害性刺激所引起的情绪反应、行为反应以及生理功能障碍。
疼痛是许多疾病的症状，是机体受到不良刺激或损害的一种信号和反应。根据疼痛所表现出的行为反应，目前应用的疼痛模型有：
1、热刺激法
1) 辐射热刺激法
用一定强度的温度来刺激动物躯体的某一部分使其产生疼痛反应。大白鼠以甩尾反应时间为痛反应指标。实验时，用秒表计时，从照射开始到甩尾的时间作为痛阈。
2) 热板法
实验时，把小白鼠放在预先加热到55℃金属板上，以舔后足为常用痛反应指标。给药后痛反应时间延长一倍以上者作为有效镇痛药物。
注意事项：
1) 反复连续测定应注意防止局部烫伤而影响结果。
2) 注意正常鼠体温应与室温相近，室温应在20℃左右。
3) 给药前测试痛阈时，注意反应时间少于2s（10s,热板法）或大于10s（30s，热板法）表示该动物反应过敏或迟钝，则剔除不用。
4) 热板法要求必须用雌性动物。
评价：
1) 仪器装置简单，反应灵敏，指标明确。
2) 对组织损伤小，可反复利用动物。
3) 痛反应潜伏期长，利于比较药物镇痛作用的强弱、快慢、持续时间。
4) 可用于筛选麻醉性和非麻醉性镇痛药
5) 但由于辐射热刺激法甩尾反应纯粹是一种脊髓反射，因此骨骼肌松弛药也会出现阳性结果，应加以注意。
2、机械刺激法
1) 大白鼠尾尖压痛法 用钝刀口用力压大白鼠尾，以产生嘶叫作为痛阈值。此法与大白鼠的年龄关系很大，以100-150g体重为宜。压痛部位以大白鼠尾尖1/3处敏感性较高。
3、电刺激法
1) 齿髓刺激法 目前公认牙髓神经是对痛颇敏感的刺激部位，其痛反应近似临床病理性疼痛。因此齿髓刺激法是评价镇痛药的标准而可靠的方法。此法适用于狗、猫、家兔、大白鼠等，其中以家兔应用最多。动物在麻醉下用电钻在牙齿上钻孔后，将电极插入齿髓作慢性埋藏电极。电刺激时，动物因疼痛会出现咀嚼运动与摆头等反应，这些反应可视为痛阈的指标。
方法评价：反应灵敏、稳定，电刺激引起的舔舌/咀嚼反应比较一致。
2) 鼠尾刺激法 以串脉冲方波刺激大白鼠尾尖1/3处，以引起甩尾和嘶叫反应的电流强度作为痛反应指标。
4、化学刺激法 许多化学物质如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等，接触到完整的皮肤和粘膜时，即引起疼痛反应。因此，将某些化学物质给入动物体内可产生疼痛，造成疼痛模型，作为研究疼痛生理及筛选镇痛药物的方法。小白鼠扭体法是筛选镇痛药的常用方法之一，采用一些化学刺激物注入小鼠腹腔内，引起深部的、大面积而较持久的疼痛刺激，致使小白鼠产生“扭体”反应（腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起）。观察给予化学刺激药物15分钟内发生“扭体”反应的小白鼠或各小白鼠发生的“扭体”次数。如：酒石酸蒂钾、醋酸等。化学刺激法是筛选非麻醉性镇痛药的常用方法。
三、 材料：
1、动物：小鼠 雌性（雄性动物受热阴囊下垂，由于阴囊皮肤对热敏感，小鼠易跳跃，观察不到舔后足的现象。）
2、器材：恒温水浴、热板、天平、鼠笼、注射器
3、药品：0.1%盐酸吗啡、生理盐水
四、 方法：
1、调节仪器：55±0.5℃
注意：水量应以刚能浸入热板底为宜，不宜过多，致使热板漂浮。应保证热板底的温度是55±0.5℃，
2、预选：10只选6只合格鼠。
原则：
1) 痛阈值为从小鼠放入热板到出现舔后足现象的时间，用秒表计时。
2) 放入热板后，若小鼠跳跃者剔除。
3) 痛阈时间应在10-30S之间，否则剔除。
4) 应测两次痛阈时间，取均值，但需注意两次测定的时间间隔应超过5分钟。
3、称重、标记、分组（按痛反应时间分组）。
4、给药：
对照组：i.p. 生理盐水 0.15ml/10g
给药组：i.p. 吗啡 0.15ml/10g
测定给药后15’、30’、45’、60’的痛阈值。
注意：
1) 每隔2’给药1只小鼠
2) 每只小鼠在一个时间点上测1次。
3) 每个热板只能放1只小鼠。
4) 小鼠60S还没有出现舔后足现象，应立即取出，防止小鼠脚掌烫伤。痛阈值按60S计。
5) 热板内不许有水、鼠粪等异物。
五、 结果处理：
a) 计算不同时间痛阈提高百分率：
痛阈提高百分率＝
统计每四组同学的数据，求出均值，标准误，进行下一步计算。
b) 作图：以时间为横坐标，以痛阈提高百分率均值为纵坐标作图，以标准误描述误差线，各时间点以折线连接。
c) T检验：
同抗炎实验。
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