总补体活性（CH50）的测定

【原理】 
补体能使溶血素（抗绵羊红细胞抗体）致敏的绵羊红细胞（SRBC）发生溶血，当致敏的绵羊红细胞浓度恒定时，溶血程度与补体含量和活性呈正比例关系。因此，将新鲜待检血清做不同稀释后，与致敏红细胞反应，测定溶血程度，以50%溶血时的最小血清量判定终点，可测知补体总溶血活性。以50%溶血判断结果比100%溶血灵敏、准确。 
【材料】 
1.待检人血清：静脉抽血，待凝后立即分离血清进行测定或-70℃保存。 
2.缓冲盐水（pH7.4）：取NaCl  75g，1mol/L  HCl  177ml，三乙醇胺28ml，MgCl2·6H₂O 1.0g，CaCl₂·2H₂O  0.2g。先将NaCl 溶于700 ml蒸馏水中，再加入HCl和三乙醇胺。将MgCl₂·6H₂O和CaCl₂·2H₂O分别 用2 ml蒸馏水溶解后，逐一加入，再用蒸馏水加至1000 ml，4℃保存。临用前取上述溶液1份加9份蒸馏水，4℃保存待用。 
3.2%SRBC悬液：新鲜脱纤维羊血或Alsever液保存羊血（4℃可保存3周）用生理盐水洗2次，第三次用缓冲盐水，2000rpm离心30min。取压积红细胞以缓冲盐水配成2%悬液。为使浓度标准化，可将2%SRBC悬液用缓冲盐水稀释25倍，于分光光度计（542nm）测定透光率（以缓冲盐水校正透光率至100%）。每次实验用红细胞浓度（透光率）必须一致。 
4.生理盐水 
5.溶血素（anti-SRBC）：按说明书所标效价以缓冲盐水稀释至2单位。如效价为1：8000，使用时1：4000稀释。 
6.致敏SRBC：2%SRBC加等量2单位溶血素，混匀，置37℃水浴10min。 
7.50%溶血标准管：取2%SRBC悬液0.5ml，加入蒸馏水4.5ml，混匀。 
8.37℃水浴箱 
9.离心机 
10.     分光光度计 
11.     试管、吸管 
【方法】 
1.取待检人血清0.2ml，加入缓冲盐水3.8ml，使成1：20稀释。 
2.按下表所示加入各试剂，混匀，将试管置于37℃水浴30min。 
                表  CH₅₀法测定总补体活性操作

【结果】 
将各试管2500rpm离心5min，取上清液与50%溶血标准管目视比较，观察溶血程度。取与50%溶血标准管相接近的两管在分光光度计上分别读取光密度值A₅₄₂nm （0.5cm比色杯，以缓冲盐水作为空白调零），以最接近50%溶血标准管的一管，按下列公式计算CH₅₀活性。

本法测定的正常值范围为50-100 U/ml。
【讨论】
1.操作注意事项
（1）待检血清标本应无溶血、无乳糜、无污染。
（2） 缓冲液、致敏SRBC均应新鲜配制，缓冲液若被细菌污染，会导致自发溶血。
（3）待检血清标本必须新鲜，如室温放置2h以上，会使补体活性下降。
（4） 实验所用玻璃器皿，一定要清洁，酸碱均能影响测定的准确性。
（5） 测定需在0℃-4℃进行，试管需预冷，可保持补体活性。
（6）  补体的溶血活性与反应时缓冲液的pH、离子强度、钙镁离子量、羊红细胞量、反应总体积及反应温度均有一定关系，因此实验时需对反应的各个环节做严格控制。
2.方法学评价
（1）本法简便快速，但敏感性较低，不能测定补体蛋白的绝对值。
（2）总补体活性的测定主要反映补体C1~C9通过经典途径活化的程度。
3.临床意义
（1）    在急性炎症、感染、组织损伤（如风湿热急性期、结节性动脉周围炎、皮肌炎、伤寒、Reiter综合征和多发性结节炎）、癌肿、骨髓瘤等时，常可见补体含量增高。
（2）    低补体血症多见于急性肾小球肾炎、膜增殖性肾小球肾炎、SLE活动期、RA、亚急性细菌性心内膜炎、急性乙型病毒性肝炎、遗传性血管神经性水肿等。