基本方案
辅助方案
备选方案1
辅助方案
备选方案2
备选方案3
实验材料 | 融合蛋白 |
---|---|
试剂、试剂盒 | SDS |
仪器、耗材 | 水浴锅 培养箱 离心机 |
实验步骤 |
1. 准备两个小量预试验反应以确定最佳温育时间:
(1)反应1:20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白,室温下反应
2. 分别在2、4、8和24 h取出5 μl 反应液,加2×SDS样品缓冲液5 μl,-20℃下冻存。
5. 将所有样品于沸水浴中加热10 min,加样到SDS-聚丙烯酰胺凝胶上电泳,根据裂解程度确定适当的温育时间。
6. 确定了适当的裂解条件后,将余下的融合蛋白样本按比例扩大反应,仅留小量的未裂解融合蛋白作对照用。以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳监测裂解程度。
展开 |