二氢硫辛酰胺脱氢酶的测定实验

酶样品

磷酸钾 NAD DTE DL-二氢硫辛酰胺

分光光度计

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.96 ml 实验混合物

0.02 ml 0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺 4.0 mol/L

0.02 ml 酶样品

开始加入 0.01 ml 0.1 mmol/L H₂O₂ 溶液

30℃ 时，于 340 nm 处吸收值发生变化，ε₃₄₀＝6.3×10³ l/（mol·cm）。

试剂：

0.1 mol/L 磷酸钾，pH7.5

0.1 mol/L NAD（游离酸，Mr＝663.4；663 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L DTE（二硫赤藓糖醇，Mr＝154.2；或二硫苏糖醇，DTT，Mr＝154.2；154 mg 溶于 10 ml 水中）

0.2 mol/L DL-二氢硫辛酰胺（Mr＝207.3；52 mg 溶于 1.25 ml 乙醇或者丙酮。原料溶液浓度的二氢硫辛酰胺不可溶于水中，而且不可溶于酒精。存在醇脱氢酶时，例如天然的乙醇可以与 NAD 反应形成乙醛和 NADH，因此必须排除这个酶的活性，若两者选一，底物必须溶解于丙酮溶液中）。